上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
产品来源
大肠杆菌菌株,携带有克隆的 nei 基因。
- 产品类别:
- DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分:
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
M0299S -20 Endonuclease VIII M0299SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml Endonuclease VIII Reaction Buffer B0299SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
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M0299L -20 Endonuclease VIII M0299LVIAL -20 1 x 0.5 ml 10,000 units/ml Endonuclease VIII Reaction Buffer B0299SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
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特性和用法
单位定义
1 单位指在 10 µl 总反应体系,含 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链的 1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液中,37℃ 条件下,1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点*的 34 bp 寡核苷酸双链所需的酶量。
* AP 位点创建方法:37℃ 条件下,用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。
反应条件
1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液
Incubate at 37°C1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液
10 mM Tris-HCl
75 mM NaCl
1 mM EDTA
(pH 8 @ 25°C)贮存溶液
10 mM Tris-HCl
250 mM NaCl
0.1 mM EDTA
50% Glycerol
pH 8 @ 25°C热失活
75°C for 10 minutes
单位活性检测条件
10 μl 总反应体系,含 1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液和 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链。
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优势和特性
应用特性
- 单细胞凝胶电泳(彗星试验)(3,4,5)
- 碱洗脱(6)
- 碱解旋(7)
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注意事项
- 彗星试验的推荐稀释倍数:1:104 到 1:105(3,4,5,8)。具体操作说明请登陆:http://cometassay.com
- 核酸内切酶 VIII 在 rCutSmart 缓冲液(NEB #B6004)中具有完全活性。核酸内切酶 VIII 在 NEBuffer 1(NEB #B7001)中的活性为 75%,在 NEBuffer 4(NEB #B7004)中的活性为 75%,在 NEBuffer 2(NEB #B7002)中的活性为 50%。不建议在 NEBuffer 3(NEB #B7003)中使用核酸内切酶 VIII。
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参考文献
- Dizdaroglu, M., Laval, J. and Boiteux, S. (1993). Biochemistry . 32, 12105-12111.
- Hatahet, Z. et al. (1994). J. Biol. Chem.. 269, 18814-18820.
- Singh, N. et al. (1988). Exp. Cell. Res. . 175, 184-191.
- Collins, A. et al. (1993). Carcinogenesis . 14, 1733-1735.
- Collins, A. et al. (1996). Environ. Health Perspect . 104, 465-469.
- Pflaum, M. et al. (1998). Free Rad. Res. . 29, 585-594.
- Hartwig, A. et al. (1996). Toxicol. Lett.. 88, 85-90.
- Marks, K. unpublished observation.
操作说明、说明书 & 用法
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使用指南
- Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
- DNA Damage and PreCR
工具 & 资源
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选择指南
- Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
- DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
- Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- What is the activity of Endonuclease VIII in NEBUffers?
- Does Endonuclease VIII cleave RNA?
- Does treatment of DNA with Endonuclease VIII leave a 5′ phosphate?
- What damaged bases does Endonuclease VIII recognize?
- Will Endonuclease VIII work in rCutSmart buffer?