产品信息

Vent^® DNA 聚合酶是一种高保真耐热 DNA 聚合酶。Vent DNA 聚合酶的保真度比 Taq DNA 聚合酶的保真度高 5 – 15 倍（1,2）。这种高保真度部分源自 Vent DNA 聚合酶中完整的 3´→5´ 核酸外切酶校读活性（1,3）。在 95℃ 条件下温育 1 小时后，仍保留 90% 以上的聚合酶活性。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自热球菌（Thermococcus litoralis）（4）的 Vent^® DNA 聚合酶基因。这种原生生物从海底火山口（5）中分离出来，可在高达 98℃ 的温度下生长。

产品类别:

Other PCR Polymerases Products

应用:

Routine PCR,

PCR

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0254V     -20       Vent® DNA Polymerase M0254VVIAL -20 1 x 0.05 ml 2,000 units/ml   ThermoPol® Reaction Buffer B9004SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X   Magnesium Sulfate (MgSO4) Solution B1003SVIAL -20 1 x 1.5 ml 100 mM
  M0254S     -20       Vent® DNA Polymerase M0254SVIAL -20 1 x 0.1 ml 2,000 units/ml   ThermoPol® Reaction Buffer B9004SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X   Magnesium Sulfate (MgSO4) Solution B1003SVIAL -20 1 x 1.5 ml 100 mM
  M0254L     -20       Vent® DNA Polymerase M0254LVIAL -20 1 x 0.5 ml 2,000 units/ml   ThermoPol® Reaction Buffer B9004SVIAL -20 3 x 1.5 ml 10 X   Magnesium Sulfate (MgSO4) Solution B1003SVIAL -20 1 x 1.5 ml 100 mM

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位是指在 75℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。
  

  反应条件

  1X ThermoPol^® 反应缓冲液套装

  1X ThermoPol^® 反应缓冲液套装
  20 mM Tris-HCl
  10 mM (NH₄)₂SO₄
  10 mM KCl
  2 mM MgSO₄
  0.1% Triton® X-100
  (pH 8.8 @ 25°C)

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  100 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  0.1% Triton® X-100
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25°C

  热失活

  否

  分子量

  理论上的: 89000 道尔顿

  3′ – 5′ 核酸外切酶

  Yes

  链置换

  +

  产物末端

  • 平末端

  单位活性检测条件

  1X ThermoPol 缓冲液、每种浓度为 200 µM 的 dNTP（含 [³H]-dTTP）、15 nM 已结合引物的 M13 DNA。

  错配率

  < 57x10^-6bases

• 优势和特性

  应用特性

  • PCR
  • 引物延伸

• 相关产品

  相关产品

  • dNTP 套装
  • dNTP 混合液

  单独销售的组分

  • ThermoPol® 反应缓冲液套装
  • Magnesium Sulfate (MgSO₄) Solution

• 注意事项

  1. 该酶不提供 BSA，因为大多数引物延伸反应不需要 BSA。但如果需要，在售有 NEB #B9001。乙酰化的 BSA 不能用于引物延伸反应。
  2. Deep Vent DNA 聚合酶在 95℃ 的半衰期为 6.7 小时。
  3. 在售稀释液 D。推荐使用此缓冲液稀释 Vent DNA 聚合酶。
  4. 本产品还提供其它 ThermoPol 反应缓冲液套装。每种缓冲液套装包含 4 管 10X 缓冲液（1.5 ml/管）和 1 管 MgSO₄（100 mM）。

• 参考文献

  1. Mattila, P. et al. (1991). Nucl. Acids Res. 19, 4967-4973.
  2. Eckert, K.A. and Kunkel, T.A. (1991). PCR Methods and Applications. 1, 17-24.
  3. Kong, H.M., Kucera, R.B. and Jack, W.E. (1993). J. Biol. Chem. 268, 1965-1975.
  4. Perler, F. et al. (1992). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89, 5577.
  5. Belkin, S. and Jannasch, H.W. (1985). Arch. Microbiol. 141, 181-186.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Guidelines for PCR Optimization for Vent DNA Polymerase
  2. Protocol for a Routine Vent PCR

• 使用指南

  • Guidelines for PCR Optimization with Thermophilic DNA Polymerases

工具 & 资源

• 选择指南

  • DNA Polymerase Selection Chart
  • Thermophilic DNA Polymerases

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Can Vent DNA Polymerase be used in other buffers?
  2. When should Vent® DNA Polymerase be used for PCR?
  3. Vent DNA Polymerase and Deep Vent DNA Polymerase produce blunt DNA ends, but my cloning depends on the primer extension product having an adenine single-base 3´ overhang.
  4. I can’t get Vent DNA Polymerase to work yet Taq DNA Polymerase works fine.
  5. Are the DNA fragments produced by Vent DNA Polymerase blunt-ended or do they have the single-base 3′ overhang that Taq DNA Polymerase yields?
  6. Can I use Vent DNA Polymerase to polish the ends of DNA fragments?
  7. I want to clone primer extension products made with Vent DNA Polymerase or Deep Vent DNA Polymerase. Are some protocols better than others?

• 问题解决指南

  • PCR Troubleshooting Guide

• 实验技巧

  反应中的酶量至关重要。尝试在反应中加入终浓度为 0.01 – 0.02 U/µl 的 Vent DNA 聚合酶。