产品信息

PURExpress^®  体外蛋白合成试剂盒是新型无细胞转录/翻译体系，用于基因快速表达分析，是由大肠杆菌翻译所必需组份纯化而构成。PURExpress 体系无核酸酶和蛋白酶的污染，保护了 DNA 和 RNA模板/复合体，避免了蛋白的修饰及降解。转录和翻译过程仅需将两管试剂混合，一步反应即可完成，几个小时内即可获得实验结果，PURExpress 体系大大地节省了宝贵的实验时间，是用于高通量技术的理想选择。

PURExpress 文献引用

图 1：使用 PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒的表达蛋白。

图 2：添加 35S-甲硫氨酸通过放射自显影显示蛋白。

图 3：使用 PURExpress 体系进行蛋白合成和纯化示意图。

图 4：使用 PURExpress 体系表达和反向纯化 DHFR（A）和 T4 DNA 连接酶（B）。

产品类别:

PURExpress,

Cell-Free Protein Expression Products,

Protein Expression Products

应用:

PURExpress,

Cell-Free Protein Expression,

Protein Expression

• 试剂盒组成

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  E6850S     -80       Solution A (E6850) B0229AVIAL -80 1 x 0.1 ml 2.5 X   PURExpress Solution B (Minus RF123) P6854AVIAL -80 1 x 0.075 ml Not Applicable   RF1 (10 μl) P6851AVIAL -80 1 x 0.01 ml Not Applicable   RF2 (10 μl) P6852AVIAL -80 1 x 0.01 ml Not Applicable   RF3 (10 μl) P6853AVIAL -80 1 x 0.01 ml Not Applicable   PURExpress Control DHFR Plasmid N0424AVIAL -20 1 x 0.01 ml 125 ng/µl

• 特性和用法

  需要但不提供的材料

  • 一般条件：37℃温育
  • 标记：³⁵S-甲硫氨酸（建议 > 1000 Ci/mmol，体外翻译级）
  • TCA 沉淀：TCA 溶液（25%、10%）、1 M NaOH、酪胺酸、乙醇、玻璃纤维过滤器、真空过滤歧管
  • SDS-PAGE：凝胶和电泳缓冲液、凝胶装置、电源、凝胶干燥器
  • 蛋白免疫印迹法：转移装置、膜、抗体和检测试剂
  • 纯化：Ni-NTA 琼脂糖、Amicon Ultra- 0.5 ml、Ultracel- 100K 膜离心过滤器

• 优势和特性

  应用特性

  • 快速合成用于蛋白质特性研究的分析量级别的样本
  • 确认开放阅读框
  • 检测突变对 ORF 的影响
  • 合成具有活性和功能域的截短蛋白
  • 掺入修饰的、非天然的或标记的氨基酸
  • 绘制抗原表位图谱
  • 毒性蛋白表达
  • 核糖体展示
  • 翻译和/或蛋白折叠研究
  • 体外区域化

• 相关产品

  相关产品

  • PURExpress® Δ (aa, tRNA) 试剂盒
  • PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒
  • PURExpress® 二硫键增强剂
  • 小鼠 RNase 抑制剂
  • PURExpress® Δ Ribosome 试剂盒
  • E. coli 核糖体

• 注意事项

  1. 阳性对照反应中，加入 2 μl 对照（DHFR）模板以及随附的每个释放因子各 0.5 μl。
  2. 每个试剂盒提供的试剂足够进行 10 次反应（25 µl 反应体系/次）。
  3. 该试剂盒单独提供三种释放因子，用户能够自行选择在有或无释放因子的条件下进行蛋白质合成/核糖体展示实验。
  4. 释放因子没有添加在溶液 B 中。根据您的实验和蛋白质模板设计，您可能仍然会观察到一个低水平的翻译终止过程。
  5. PURExpress DHFR 对照模板序列文件：Fasta、GenBank

• 参考文献

  1. Hong, S. H., I. Ntai, et al. (2013). Cell-free Protein Synthesis from a Release Factor 1 Deficient Escherichia coli Activates Efficient and Multiple Site-specific Nonstandard Amino Acid Incorporation. ACS Synthetic Biology. 3(6), 398-409. PubMedID: 24328168
  2. Kogure, H., Y. Handa, et al. (2013). Identification of residues required for stalled-ribosome rescue in the codon-independent release factor YaeJ. Nucleic Acids Research. 42(5), 3152-63. PubMedID: 24322300

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Analysis of Synthesized Protein using PURExpress (E6850)
  2. Determination of Protein Synthesis Yield with PURExpress (E3313, E6800, E6840, E6850)
  3. Protein Synthesis Reaction using PURExpress® ∆ RF123 Kit (E6850)
  4. Purification of Synthesized Protein using Reverse His-tag Purification
  5. Measurement of ³⁵S-Methionine Incorporation by TCA Precipitation and Yield Determination using PURExpress

• 说明书

  产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

  • manualE6800_E3313_E6840_E6850

• 应用实例

  • Scaling down to scale up Miniaturizing cell free protein synthesis reactions with the Echo 525 Acoustic Liquid Handler

工具 & 资源

• 选择指南

  • Protein Expression and Purification Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How is the ΔRF123 Kit E6850S different from the PURExpress E6800S kit?
  2. Where can I find many more detailed FAQs for PURExpress?
  3. When using PURExpress, I was unable to synthesize the control protein?
  4. When using PURExpress, I was able to synthesize the target protein, but full-length product is not major species?
  5. When using PURExpress, I was able to synthesize the control protein, but the target sample is not present or present in low yield?
  6. Are there PURExpress citations?

• 实验技巧

  在冰上融化试剂和建立反应体系
  使用前，请将溶液 A 和 B 充分混合。不要涡旋溶液 B 或核糖体，将其轻轻混合。
  溶液 A 可能呈浑浊白色。以均匀悬浮状态加入到反应中。
  在冰上按下列加样顺序建立反应体系：溶液 A、溶液 B、RNAse 抑制剂、水、模板 DNA 或 RNA
  建立反应体系后，要确保所有试剂都充分混合，可以轻柔地上下吸打混匀并进行短暂瞬时离心，37℃条件下温育 2 到 4 小时。