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V8蛋白酶 V8 Protease

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V8蛋白酶V8蛋白酶 V8 Protease

V8蛋白酶 V8 Protease

别名：Endoproteinase Glu C，Staphylococcal Protease Protease V8

CAS NO：66676-43-5

EC NO：3.4.21.19

分子量：约 27000

外观：白色的结晶或结晶性粉末

 

◆摘要


（蛋白质工程学试剂）（氨基酸序列分析试剂）（序列分析酶）

在温和条件下进行蛋白多肽链的切断，不会引起氨基酸残基侧链的修饰（氧化、卤化、脱酰胺等）。而且，被修饰残基（糖链、类脂体、磷酸、硫酸等的结合部位）的肽一般以完整形态被回收，而且具有良好的回收率。如果采用同样的消化条件可以实现高再现性的分段。使用底物特异性高的酶进行蛋白质的结构分析，可预测氨基酸组成的大体片段数和平均大小，并且重要的是可以避免由于部分切断（非特异性切断），导致分离的复杂化。

本品由 Drapeau 系列的 Staphylococcus aureus（ V8 菌株）分离而成，是特异性切断谷酰胺产的羧基侧链的酶。分别切断磷酸系列缓冲液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基侧链、氨系列缓冲液中包含谷氨酸羧基侧链的肽结合酯结合。因为其高底物特异性，本品被用于各种蛋白质序列分析时的肽分段。



◆特异性


切断氨缓冲液中包含谷氨酸羧基侧链的肽结合和酯结合。切断磷酸缓冲液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基侧链的肽结合和酯结合。 

活性：20 units/mg 以上

单位的定义：以 2-Phe-Leu-Glu-4-NA 为底物，在 pH 7.8，25℃ 情况下，１分钟生产１μmol ４-硝基苯胺所需酶的量为１unit。

反应：特异性切断谷氨酸的羧基侧链。

 

◆使用方法


仅切断谷氨酸羧基


在 0.01~0.1 mol/L 碳酸氢铵（pH 7.8）或者在 0.01~0.1 mol/L 醋酸铵（pH 4.0）中，酵素：底物（mol/mol）=1：30~100，在 30~37℃ 情况下，分解 2~24小时。



同时切断天冬氨酸羧基


在 0.01~0.1 mol/L 磷酸缓冲液（pH 7.8）中，以同样条件分解。


用途：各种蛋白质的序列分析的肽分段。

pH 情况：

最佳 pH：在pH 3.5~9.5 范围有蛋白酶活性。pH 4.0 及 pH 7.8 时，活性极大（以血红蛋白为底物）。

抑制情况：主要抑制剂：DFP

 

◆使用上应注意


稳定性

pH 值为 4~10 时，物质稳定。冷冻干燥或冷冻，保存时间较长。在 0.2% 的 SDS 中，具有 100% 活性：在 4 mol/L 尿素中，具有 50% 活性。

V8蛋白酶 V8 Protease

164-13982说明书

参考文献


［1］

Drapeau, G. R., Boily, Y. and Houmard, J.?J. Biol. Chem., 247, 6720 (1972)
［2］

Drapeau, G. R.?Methods in Enzymology, 47, 189 (1977)
［3］

Houmard, J. et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 3506 (1972)
［4］

日本生化学会编：续生化学讲座2，蛋白质化学，上，p268（东京化学同仁）
［5］

日本生化学会编：生化学，57,472（1985）
［6］

Austen, B. M. and Smith, E. L.Biochem. Biophys. Res. Commun., 72, 411 (1976)
［7］

Hitz, H., Schafer, D. and Wittmann-Liebold, B.?Eur. J. Biochem., 75, 497 (1977)
［8］

L'Italien, J. J. and Laursen, R. J.J. Biol. Chem., 256, 8092 (1981)
［9］

Emmens, M., Welling, G. W. and Beintema, J. J.Biochem. J., 157, 317 (1976)
［10］

Ovchinnikov, Yu. A., Lipkin, V. M., Modyanov, N. N., Chertov, O. Yu. and Smirnov, Yu. V.?FEBS Lett., 76, 108 (1977)

Richardson, C., Behnke, W. D., Freisheim, J. H. and Blumenthal, K. M.Biochim.
［11］

Biophys. Acta, 537, 310 (1978)
［12］

Kohmoto, K., Tsunasawa, S. and Sakiyama, F.?Eur. J. Biochem., 138, 227 (1984) Evenberg, A., Meyer, H., Gaastra, W., Verheij, H. M. and deHaas, G. H.  J. Biol. Chem., 252, 1189 (1977)
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Dognin, M. J. and Wittmann-Liebold, B.FEBS Lett., 84, 342 (1977) Fleer, E. A. M., Verheij, H. M. and deHaas, G. H.Eur. J. Biochem., 82, 261 (1978)
［14］

Kitagawa, Y., Tsunasawa, S., Tanaka, N., Katsube, Y., Sakiyama, F. and Asada, K.?J.Biochem. (Tokyo), 99, 1289 (1986)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
164-13982 V8 Protease
V8蛋白酶		 2 mg 生物化学
050-05941 Endoproteinase Glu-C, Sequencing Grade
测序级谷氨酰蛋白内切酶Glu-C		 50 μg 生物化学
056-05921 Endoproteinase Asp-N, Sequencing Grade
测序级天冬氨酰蛋白内切酶Asp-N		 2 μg 生物化学

PDQ Protease Assay™ PDQ蛋白酶分析™

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PDQ Protease Assay™

PDQ蛋白酶分析™

品牌：AthenaES
CAS No.：
储存条件：2-10℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

AES-0201

 – 1 kit – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

Factor Xa Protease |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Factor Xa cleaves after the arginine residue in its preferred cleavage site Ile-(Glu or Asp)-Gly-Arg. It will sometimes cleave at other basic residues, depending on the conformation of the protein substrate (1,2,3). The most common secondary site, among those that have been sequenced, is Gly-Arg. There seems to be a correlation between proteins that are unstable in E.coli and those that are cleaved by Factor Xa at secondary sites; this may indicate that these proteins are in a partially unfolded state (Walker, I., Riggs, P., unpublished observations). Factor Xa will not cleave a site followed by proline or arginine.

产品来源

Factor Xa Protease is purified from bovine plasma and activated by treatment with the activating enzyme from Russell’s viper venom.

产品类别:
Proteases Products

应用:
Fusion Protein Cleavage,
Target Protein Insolubility ,
Protein Purification,

Protein Digestion,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P8010V     -20    
        Factor Xa Protease P8010VVIAL -20 1 x 0.025 ml 1 mg/ml
    • P8010S     -20    
        Factor Xa Protease P8010SVIAL -20 1 x 0.05 ml 1 mg/ml
    • P8010L     -20    
        Factor Xa Protease P8010LVIAL -20 1 x 0.25 ml 1 mg/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 μg of Factor Xa will cleave 50 μg of MBP fusion protein test substrate, MBP-ΔSal to 95% completion in a total reaction volume of 50 μl in 6 hours or less at 23°C in 20 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C) with 100 mM NaCl and 2 mM CaCl2.

    使用浓度

    1 mg/ml

    去除

    Factor Xa will bind specifically to benzamidine-agarose.

    分子量

    理论上的: 43 kDa

    停用

    Dansyl-glu-gly-arg-chloromethyl ketone (CALBIOCHEM, #251700) will irreversibly inactivate Factor Xa by covalent attachment at the active site. In a reaction containing 20 μg/ml Factor Xa, 2 μM dansyl-glu-gly-arg-chloromethyl ketone will inactivate >95% of the Factor Xa in 1 minute at room temperature.

  • 注意事项

    1. The test substrate MBP-ΔSal is maltose-binding protein fused to a truncated form of paramyosin, with the amino acids Ile-Glu-Gly-Arg at the fusion joint. Greater than 95% of the fusion protein is cleaved in 6 hours or less.

  • 参考文献

    1. Nagai, K. et al. (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82,
    2. Quinlan, R.A. et al (1989). Cell Sci. 82, 7252-7255.
    3. Eaton, D. et al (1986). Biochemistry. 25, 505-512.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cleavage of the Fusion Protein Generated Using The pMAL Protein Fusion and Purification System (E8200)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Protease Selection Chart
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

IdeZ Protease (IgG-specific) |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

IdeZ Protease (IgG-specific) |
 
IdeZ Protease (IgG-specific) is a recombinant antibody specific protease that recognizes all human, sheep, monkey, and rabbit IgG subclasses, specifically cleaving at a single recognition site below the hinge region, yielding a homogenous pool of F(ab´)2 and Fc fragments. IdeZ Protease more effectively cleaves murine IgG2a than IdeS.

IdeZ Protease (IgG-specific) |
Digestion of lgG with IdeZ Protease (lgG-specific), followed by denaturation.

产品来源

Cloned from Streptococcus equi subspecies zooepidemicus and expressed in E. coli. 

产品类别:
Proteases Products,
Proteome Analysis Products

应用:
Proteomics

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0770S     -20    
        IdeZ Protease (IgG-specific) P0770SVIAL -20 1 x 0.05 ml 80,000 units/ml
        GlycoBuffer 2 B3704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave > 95% of 1 µg of human IgG, in 15 minutes at 37°C in a total reaction volume of 10 µl.

    反应条件

    1X GlycoBuffer 2
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 2
    50 mM Sodium Phosphate
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    分子量

    理论上的: 35578 daltons

    单位活性检测条件

    Two fold dilutions of IdeZ Protease (IgG-specific) are incubated with 1 μg of human IgG and 1X GlycoBuffer 2 in a 10 µl reaction. The reaction mix is incubated for 15 minutes at 37°C. Separation of reaction products are visualized by SDS-PAGE.

    存储注意事项

    • Avoid repeated freeze/thaw cycles.

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  • 注意事项

    1. Store at -20°C for up to two years.
    2. IdeZ Protease efficiently cleaves human, humanized, chimeric, sheep,rabbit and monkey IgG as well as mouse IgG2a and IgG3. IdeZ Proteasewill also cleave Fc-fusion proteins, such as Enbrel.
    3. IdeZ Protease does not cleave mouse IgG1 or IgG2b, rat, porcine, bovineor goat IgG. It also does not cleave non-IgG isotypes including IgA,IgM, IgD and IgE.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Reaction Conditions for IdeZ Protease (IgG-specific) (P0770)
    2. Reaction conditions for Simultaneous Digestion of IgG with IdeZ Protease (IgG-specific) and PNGase F (fragmentation and deglycosylation) (P0770)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the advantage of IdeZ over IdeS?
    2. Is IdeZ Protease active in Phosphate Buffered Saline (PBS)?
    3. Can protein A magnetic beads (NEB# S1425S) be used to create Fc and Fab fragment pools after cleavage with IdeZ Protease?
    4. Can IdeZ Protease cleave IgGs other than human?
    5. Can IdeZ Protease cleave Ig isotypes other than IgG?
    6. Can PNGase F be used together with IdeZ Protease under native conditions to deglycosylate the Fc portion of an antibody?
    7. What is the cleavage site for IdeZ Protease (IgG-specific)?