产品信息

Poly(A) 聚合酶催化由 ATP 转化成的 AMP 添加到 RNA 3´ 端，该反应不依赖模板的存在。

图 1：带帽和 Poly(A) 尾的 RNA 的分析

产品来源

大肠杆菌菌株，携带克隆自大肠杆菌的 Poly(A) 聚合酶基因（1）。

产品类别:

RNA Modification,

cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,

RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:

PCR

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0276S     -20       E. coli Poly(A) Polymerase M0276SVIAL -20 1 x 0.02 ml 5,000 units/ml   Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X   Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM
  M0276L     -20       E. coli Poly(A) Polymerase M0276LVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml   Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X   Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 20 µl 反应体系中，37℃ 条件下，10 分钟催化 1 nmol 的 AMP 掺入 RNA 所需要的酶量。

  反应条件

  1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
  Supplement with 1 mM ATP
  Incubate at 37°C

  1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
  50 mM Tris-HCl
  250 mM NaCl
  10 mM MgCl₂
  (pH 8.1 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  300 mM NaCl
  1 mM DTT
  1 mM EDTA
  50% Glycerol
  0.1% (w/v) Triton® X-100
  pH 7.5 @ 25°C

  单位活性检测条件

  20 µl 总反应体系，含 1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液、1 mM rATP 和 500 ng 5´ FAM 标记的 poly A 20-mer RNA。37℃ 温育 10 分钟后，通过凝胶电泳或自动毛细管电泳 DNA 测序仪确定 poly(A) 添加的长度。在该测定中，5 个单位的酶催化大约 60 到 80 个腺苷掺入 RNA 引物。在这些条件下，20 个单位的酶将耗尽 rATP。

• 优势和特性

  应用特性

  • 用 ATP 或虫草素标记 RNA
  • 为 RNA 添加 Poly(A) 尾，用于克隆或亲和纯化
  • 提高转染至真核细胞中 RNA 的翻译效率。

• 注意事项

  1. 提供的缓冲液不含 rATP。

• 参考文献

  1. Cao, G.J. and Sarkar, N. (1992). Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 89, 10380-10384.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Poly(A) Tailing of RNA using E. coli Poly(A) Polymerase (NEB# M0276)

工具 & 资源

• 选择指南

  • RNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How can the E. coli Poly(A) Polymerase be inactivated without heating up the reaction?
  2. Does the E. coli Poly(A) Polymerase work in the M-MuLV reverse transcriptase buffer?
  3. Can E. coli Poly(A) Polymerase be used to add a poly A tail to ssDNA?
  4. Can E. coli Poly(A) Polymerase also add GTP, UTP and CTP to RNA?
  5. Can I end-label a polyadenylated RNA molecule with a Cy3/5 or biotin-modified base using the E. coli Poly(A) Polymerase?
  6. Does E. coli Poly(A) Polymerase work on tRNA?
  7. Is MnCl₂ required for a reaction with E. coli Poly(A) Polymerase?
  8. Is it possible to have the same length of poly A added to all RNA molecules by E. coli Poly(A) Polymerase?
  9. Can we use the ribonucleotide Mix (N0466) to replace the addition of an rATP solution for the poly A tailing of an RNA template by E.coli Poly(A) polymerase?
  10. Is the E.coli Poly(A) polymerase able to elongate short and surface-immobilized oligoribonucleotides? What is the minimum length of an RNA sequence that can be recognized by the enzyme and, therefore, elongated?
  11. What is the molecular weight of E.coli Poly(A) polymerase?

• 实验技巧

  E. coli Poly(A) 聚合酶（M0276）

  使用前对试管进行轻柔涡旋处理。

  可通过向反应中添加终浓度为 10 mM 的 EDTA 让 Poly(A) 聚合酶失活。

  Poly (A) 聚合酶与 M-MuLV 反转录酶缓冲液兼容。如果准备在多聚腺苷酸化反应后进行反转录，建议这两个反应顺序进行。首先使用反转录酶缓冲液进行多聚腺苷酸化反应。随后添加反转录所需的组份。

  强烈建议戴手套、使用无核酸酶的试管和试剂并彻底清洁移液器和工作台表面，避免 RNase 污染。