产品信息

EnGen Spy Cas9 NLS 核酸酶是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可催化双链 DNA 的位点特异性切割。该酶可识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列（1）的 NGG 处，并在靶标序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 序列互补的 DNA 的链上。EnGen Spy Cas9 NLS 核酸酶蛋白的 N 端和 C 端都含有猴病毒 40（SV40）T 抗原核定位序列（NLS）。

使用 Cas9 RNP 复合物注射方法提高了基因组编辑效率

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因，在其编码蛋白的 N 端和 C 端都含有猴病毒 40（SV40）核定位序列（NLS），N 端同时带有 6xHis 标签。

产品类别:

Genome Editing Products,

Programmable Nucleases Products

应用:

Genome Editing Applications

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0646T     -20       EnGen® Spy Cas9 NLS M0646TVIAL -20 1 x 500 pmol 20 µM   NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
  M0646M     -20       EnGen® Spy Cas9 NLS M0646MVIAL -20 1 x 2,500 pmol 20 µM   NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

• 特性和用法

  反应条件

  1X NEBuffer™ r3.1
  Incubate at 37°C

  1X NEBuffer™ r3.1
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25°C)

  贮存溶液

  300 mM NaCl
  10 mM Tris-HCl
  0.1 mM EDTA
  1 mM DTT
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25°C

  热失活

  65°C for 5 minutes

• 注意事项

  1. 20 μM 等于 3.22 mg/ml

• 参考文献

  1. Jinek M. et al. (2012). Science. 816-821. DOI: 10.1126/Science.1225829. Epub 2012 Jun 28 PubMedID: 22745249,

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. In vitro digestion of DNA with EnGen Spy Cas9 NLS (M0646)
  2. Protocol for Electroporation of EnGen® SpyCas9 NLS, S. pyogenes RNP (ribonucleoprotein) into adherent cells using the Lonza 4D-Nucleofector™ System
  3. Transfection of Cas9 RNP (ribonucleoprotein) into adherent cells using the Lipofectamine® RNAiMAX
  4. Electroporation of EnGen^® Spy Cas9 NLS RNP (ribonucleoprotein) into adherent cells using the Neon^® Electroporation System
  5. In vitro digestion of plasmid DNA with EnGen SpRY Cas9 (NEB #M0669)

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Where is the nuclear localization signal on EnGen^® Spy Cas9 NLS located?
  2. Which nuclear localization signal is fused to EnGen^® Spy Cas9 NLS?
  3. What is the difference between EnGen^® Spy Cas9 NLS (NEB #M0646) and Cas9 NLS, S.pyogenes (NEB #M0641)?
  4. Why do I observe incomplete digestion?
  5. Why does digestion/editing efficiency differ between two different guide RNAs?
  6. Does NEB provide plasmids for gRNA cloning?
  7. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
  8. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?