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NiCo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

BL21（DE3）源大肠杆菌（E. coli）化学感受态细胞 利用固相金属离子亲和层析（IMAC）分离含多聚组氨酸标签的重组蛋白时，目的蛋白经常被大量的大肠杆菌（E. coli）内源金属结合蛋白所污染。蛋白表达菌 NiCo21（DE3）经基因工程改造，使 IMAC 组分中的 E. coli 蛋白污染减少到最低：GlmS 在突变后消除了与 IMAC 树脂结合的能力，另外三种蛋白（SlyD、ArnA 和 Can）在加上重组标签后，能够通过几丁质亲和层析快速去除。

重点

  • 常规表达时 BL21（DE3）的卓越替代品
  • 通过 IMAC 分离的目的蛋白纯度更佳
  • 与 BL21（DE3）的生长特点一致
  • Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
  • 抗噬菌体 T1（fhuA2）
  • 无动物来源产品

基因型

can::CBD fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] arnA::CBD slyD::CBD glmS6Ala ∆hsdS λ DE3 = λ sBamHIo ∆EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ∆nin5

产品类别:
Nickel Purification (His-tag),
T7 Expression,
Affinity Purification Products,

Protein Purification Products,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
His-tagged Protein Expression & Purification,
Affinity Purification & Expression Tags,
Protein Purification,

T7 Expression,
Peptide Ligation,
Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C2529H     -80    
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        SOC Outgrowth Medium B9020SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        NiCo21(DE3) Competent E. coli C2529HVIAL -80 20 x 0.05 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Chloramphenicol 33 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

  • 优势和特性

    Features

    • 通过 IMAC 分离的目的蛋白纯度更佳

    应用特性

    利用 NiCo21（DE3）提高 His 标签蛋白的纯度NiCo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |
    A)在 NiCo21(DE3) E. coli 感受态细胞中表达谷氨酰 tRNA 合成酶（6-His），随后进行 Ni-NTA 纯化。将来自 Ni-NTA 柱的洗脱液（E）通过几丁质柱。目的蛋白在流动相（FT）中被洗脱，而 CBD 标签金属结合蛋白仍然保持与几丁质树脂（NEB #S6651）结合（B）。按照制造商推荐的条件进行纯化。B) 利用抗 CBD 抗体（NEB #E8034），通过 Western blot 检测污染物 ArnA、SlyD 和 Can。

    两步纯化在 NiCo21（DE3）E. coli 菌株中表达的目的蛋白
    NiCo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |

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    • 几丁质树脂
    • 抗 CBD 单克隆抗体
    • 几丁质磁珠
    • 6 孔磁性分离架
    • 12 孔磁性分离架
    • 96 孔微孔板磁性分离架

    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 注意：本产品含有害物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    2. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

  • 参考文献

    1. Bolanos-Garcia and Davies (2006). Biochimica et Biophysica Acta. 1760, 1304-1313.
    2. Carine Robichon, Jianying Luo, Thomas B. Causey, Jack S. Benner, and James C. Samuelson (2011). Applied and Environmental Microbiology. 77, 4634-4646.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. 5 Minute Transformation Protocol (C2529)
    2. Expression Using NiCo21(DE3) (C2529)
    3. Protocol for Removal of IMAC Contaminating Proteins (C2529)
    4. High Efficiency Transformation Protocol (C2529)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Selection Guide

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does New England Biolabs offer strains of Competent E.coli suited for protein expression?
    2. What are the solutions/recipes (C2529)?
    3. Why are there no colonies or no growth in liquid culture (C2529)?
    4. Why is the induced protein insoluble (C2529)?
    5. Why is there no protein visible by SDS-PAGE or no activity (C2529)?
    6. What are the strain properties (C2529)? 
    7. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    8. Which kind of transformation tubes should be used?
    9. What volume of DNA can be added into competent cells?
    10. What is the shelf life for this strain (NEB #C2529H)?
    11. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    12. How should I store SOC Outgrowth Medium? The SOC I received with my competent cells recommends storage at either room temperature or 4°C, however, when I purchase it as a stand alone product, it recommends storing it at 4°C. Which is better?
    13. Is T7 expression subject to catabolite repression in BL21(DE3) and derivative strains?
    14. What expression plasmids can be used with NiCo21(DE3)?