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SHuffle® T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

经基因工程改造的大肠杆菌（E. coli）化学感受态 B 细胞，可在细胞质中表达含有二硫键的蛋白。适合 T7 启动子驱动的毒性蛋白表达。

重点

  • 经过基因工程改造的大肠杆菌（E. coli）B 菌株，可促进细胞质中二硫键的形成
  • 组成性表达二硫键异构酶 DsbC 的染色体拷贝
  • DsbC 促进错误氧化蛋白纠正为正确形式（1、3）
  • 细胞质 DsbC 也是一种分子伴侣，有助于不需二硫键的蛋白折叠（4）
  • 表达 T7 RNAP 的染色体拷贝
  • 表达自 miniF 质粒，溶菌酶失活突变
  • 可表达毒性蛋白
  • BL21 源增强型菌株
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA2）、Cam、Nit、Spec 和 Str*

    *可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 —TetS) endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

产品类别:
SHuffle Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Expression of Difficult Proteins,
Disulfide-bonded Protein Expression,

Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3030J     -80    
        SHuffle® T7 Express lysY Competent E. coli C3030JVIAL -80 12 x 0.05 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • str（可能观察到对低水平的链霉素存在抗性）
    • nit
    • spec
    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • T7 表达
    • 蛋白酶缺失/B 菌株
    • 严格调控毒性蛋白表达
    • 在细胞质中正确折叠具有多个二硫键的蛋白的能力更强

    应用特性

    图 1：粗裂解物 vtPA 活性测定：SHuffle® T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 |
    截短型组织纤溶酶原激活剂（vtPA），表达自大肠杆菌（E. coli）细胞质的 pTrc99a 质粒，当正确折叠和氧化时包含 9 个二硫键。诱导后收集细胞并制备粗细胞裂解物。使用显色底物 Chromozym t-PA（Roche #11093037001）测定 vtPA 活性，并使用 Bradford 试剂进行蛋白浓度测定。大肠杆菌（E. coli）wt+ 细胞为 DHB4，是 FÅ113（Origami™）的亲本。
    图 2：从粗裂解物测定的 PfCHT1 几丁质酶活性：SHuffle® T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 |
    在 T7 启动子调控下，表达自质粒的恶性疟原虫几丁质酶（PfCHT1）含三个半胱氨酸。诱导后收集细胞并制备粗细胞裂解物。使用显色底物（CalBioChem #474550）测定 PfCHT1 活性，并使用 Bradford 试剂进行蛋白浓度测定。

  • 相关产品

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    • SOC Outgrowth 培养基
    • SHuffle® T7 E. coli 感受态细胞
    • SHuffle® 表达 E. coli 感受态细胞
    • SHuffle® T7 表达 E. coli 感受态细胞

  • 注意事项

    1. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

  • 参考文献

    1. Bessette, P.H. et al. (1999). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 13703-13708.
    2. Qiu, J., Swartz, J.R. and Georgiou, G. (1998). Appl. Environ. Microbiol. 64, 4891-4896.
    3. Levy, R. et al. (2001). Protein Expr. Purif. 23, 338-347.
    4. Chen, J. et al. (1999). J. Biol. Chem. 274, 19601-19605.
    5. Boyd, D. et al. (2000). J. Bacteriol. 182, 842-847.
    6. de Marco, A. (2009). Microbial Cell Factories. 8, 26.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Expression Using SHuffle (C3030)
    2. Transformation Protocol (#C3029, #C3026, #C3028 and #C3030)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Transformation of SHuffle® Competent Cell Strains

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide
    • SHuffle® Strain Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the strain properties (C3030)?
    2. What applications are SHuffle® strains useful for?
    3. Does my protein have disulfide bonds?
    4. Which SHuffle® strain should I use?
    5. Is there anything I can do to increase protein yield when using SHuffle strains?
    6. What are the growth characteristics of the SHuffle strains?
    7. How do SHuffle® strains aid in cytoplasmic disulfide bond formation?
    8. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    9. How should I express my protein of interest in SHuffle?
    10. Does Streptomycin and/or Spectinomycin need to be added when growing SHuffle strains?
    11. Can I conduct M13 phage display experiments in SHuffle strains?
    12. Can I conduct blue/white screening using alpha complementation of lacZ in SHuffle strains?
    13. Which SHuffle strains are resistant to chloramphenicol? Is chloramphenicol required for maintenance of the mini F plasmid?
    14. Do SHuffle cells grow in minimal media?
    15. Are SHuffle strains temperature sensitive?
    16. Is the genome of SHuffle strains available?
    17. Is T7 expression subject to catabolite repression in NEB T7 Express or SHuffle strains?
    18. Can one use SHuffle cells to secrete my protein of interest?

T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

BL21 源增强型大肠杆菌（E. coli）化学感受态细胞，适合高效级转化和蛋白表达。

重点

  • 无动物来源产品
  • 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，从而允许克隆潜在的毒性基因
  • LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性，从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象
  • 溶菌酶质粒的维持无需抗生素筛选
  • BL21 源增强型菌株
  • 不受限于 DNA 是否甲基化（McrA–、McrBC–、EcoBr–m–、Mrr–）
  • Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
  • 以溶菌酶进行表达控制
  • 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体
  • 无需 Cam
  • 菌落快速培养
  • miniF 上的溶菌酶增强稳定性
  • 抗噬菌体 T1（fhuA2）Cam、Nit
  • B 菌株

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10

产品类别:
T7 Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Toxic Protein Expression,
Expression of Difficult Proteins,

Peptide Ligation,
Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3010I     -80    
        T7 Express lysY Competent E. coli (High Efficiency) C3010IVIAL -80 6 x 0.2 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • nit
    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • T7 表达
    • 蛋白酶缺失
    • 更好地降低本底表达

    应用特性

    毒性哺乳动物克隆转化大肠杆菌（E. coli）宿主T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 T7 表达质粒和含有编码毒性哺乳动物蛋白的基因的相同质粒转化到每个宿主中。相对转化效率的比较表明，T7 表达宿主提供了转化潜在毒性克隆所需的控制水平。不能用 BL21（DE3）转化毒性克隆。
    T7 调控无毒蛋白在大肠杆菌（E. coli）宿主中的表达T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将含有编码大肠杆菌（E. coli）蛋白的基因的 T7 表达质粒转化到每个宿主中，培养至 0.6 OD 并诱导 3 小时。未诱导（-）和诱导（+）细胞可溶性提取物的比较显示了对 T7 表达宿主中本底表达的卓越控制，并同时保持高水平的诱导表达。
    热激时间对 T7 表达 lysY E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅热激时间为 0 至 80 秒不等。
    DNA 孵育时间对 T7 表达 lysY E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅 DNA 孵育时间为 0 至 40 分钟不等。

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    • T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级）
    • T7 表达 E. coli 感受态细胞（高效级）

    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 维持 miniF 质粒无需抗生素。如果添加氯霉素，则终浓度为 10 µg/ml。
    2. 注意：本产品含有害物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    3. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. High Efficiency Transformation Protocol (C3010)
    2. 5 Minute Transformation Protocol (C3010)
    3. Protocol for Expression Using T7 Express lysY (C3010)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Protein Expression with T7 Express Strains

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Why are there no colonies or no growth in liquid culture (C3010)?
    2. Why is there no protein visible on gel or no activity (C3010)?
    3. Why is induced protein insoluble (C3010)?
    4. What are the solutions/recipes (C3010)?
    5. What are the strain properties (C3010)?
    6. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    7. What is the difference between NEB #C3010H and NEB #C3010I?
    8. What is the optimal heat shock time for this strain (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    9. How long should I incubate cells on ice after DNA has been added (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    10. Is T7 Express lysY (NEB #C3010H and NEB #C3010I) compatible with auto-induction procedures?
    11. Which kind of transformation tubes should be used?
    12. What volume of DNA can be added into competent cells?
    13. What s the shelf life for this strain (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    14. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    15. Is antibiotic selection necessary to maintain the MiniF-lysY plasmid?
    16. Is T7 expression subject to catabolite repression in NEB T7 Express or SHuffle strains?

T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

大肠杆菌（E. coli）化学感受态细胞，适合高效级转化和蛋白表达。

重点

  • BL21 源增强型菌株，适合 T7 表达
  • 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体
  • 通过 laclq 精确控制表达，从而允许克隆潜在的毒性基因
  • 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，使毒性基因得以表达
  • LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性，从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象
  • 溶菌酶/lacIq 质粒的维持无需抗生素筛选
  • Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
  • 抗噬菌体 T1（fhuA2）
  • 不受限于 DNA 是否甲基化（McrA–、McrBC–、EcoBr–m–、Mrr–）
  • B 菌株
  • 无动物来源产品

基因型

MiniF lysY lacIq(CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 Δ(mcrC-mrr) 114::IS10

产品类别:
T7 Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Toxic Protein Expression,
Membrane Protein Expression,

Expression of Difficult Proteins,
Peptide Ligation,
Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3013I     -80    
        T7 Express lysY/Iq Competent E. coli (High Efficiency) C3013IVIAL -80 6 x 0.2 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • nit
    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • T7 表达
    • 蛋白酶缺失
    • 最高水平的表达控制

    应用特性

    毒性哺乳动物克隆转化大肠杆菌（E. coli）宿主 T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 T7 表达质粒和含有编码毒性哺乳动物蛋白的基因的相同质粒转化到每个宿主中。相对转化效率的比较表明，T7 表达宿主提供了转化潜在毒性克隆所需的控制水平。不能用 BL21（DE3）转化毒性克隆。
    T7 调控无毒蛋白在大肠杆菌（E. coli）宿主中的表达T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将含有编码大肠杆菌（E.coli）蛋白的基因的 T7 表达质粒转化到每个宿主中，培养至 0.6 OD 并诱导 3 小时。未诱导（-）和诱导（+）细胞可溶性提取物的比较显示了对 T7 表达宿主中本底表达的卓越控制，并同时保持高水平的诱导表达。
    热激时间对 T7 表达 lysY/Iq  E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅热激时间为 0 至 80 秒不等。
    DNA 孵育时间对 T7 表达 lysY/Iq E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY/Iq E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅 DNA 孵育时间为 0 至 40 分钟不等

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    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 注意：本产品含有害物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    2. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。
    3. 维持 miniF 质粒无需抗生素。如果添加氯霉素，则终浓度为 10 µg/ml。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. High Efficiency Transformation Protocol (C3013)
    2. 5 Minute Transformation Protocol (C3013)
    3. Protocol for Expression Using T7 Express lysY/Iq (C3013)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Protein Expression with T7 Express Strains

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
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FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Why are there no colonies or no growth in liquid culture (C3013)?
    2. Why is there no protein visible on gel or no activity (C3013)?
    3. Why is induced protein insoluble (C3013)?
    4. What are the solutions/recipes (C3013)?
    5. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    6. What is the difference between NEB #C3013H and NEB #C3013I?
    7. What are the strain properties (C3013)?
    8. What is the optimal heat shock time for this strain (NEB #C3013H and NEB #C3013I)?
    9. How long should I incubate cells on ice after DNA has been added (NEB #C3013H and NEB #C3013I)?
    10. Is T7 Express lysY/Iq (NEB #C3013H and NEB #C3013I) compatible with auto-induction procedures?
    11. Which kind of transformation tubes should be used?
    12. What volume of DNA can be added into competent cells?
    13. What is the shelf life for this strain (NEB #C3013H and NEB #C3013I)?
    14. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    15. Is antibiotic selection necessary to maintain the MiniF-lysY-lacIq plasmid?
    16. Is T7 expression subject to catabolite repression in NEB T7 Express or SHuffle strains?