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Luna® Cell Ready 裂解模块 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Luna® Cell Ready 裂解模块 |

细胞培养常替代活体生物用于分析基因表达或治疗反应。传统上，人们通过柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA。Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估 RNA 表达水平，是一种快速、方便且灵敏的替代方案。此模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除，生成的细胞裂解物可直接使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使得整个流程可视化。

兼容 Luna Cell Ready 裂解模块的细胞系如下表所示。这些细胞进行 5 个 10 倍梯度稀释（在 50 µl 体系中裂解 10 – 100,000 个细胞），并取 1 µl 裂解物在 20 µl 体系中进行一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外，上述裂解模块经测试也可用于一些昆虫细胞系。

表 1：验证过的细胞系
 

细胞系 特性 种属 50 μl 裂解体系中的细胞数量
A549 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
HEK293 贴壁培养 人肾脏细胞 10 – 100,000
HeLa 贴壁培养 人子宫颈腺癌细胞 10 – 100,000
HepG2 贴壁培养 人肝脏癌细胞 10 – 1,000
NCI-H460 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
SK-N-SH 贴壁培养 人脑成神经细胞瘤细胞 10 – 10,000
U2Os 贴壁培养 人骨骼骨肉瘤细胞 10 – 100,000
Jurkat 悬浮培养 人 T 淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
K-562 悬浮培养 人成淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
图 1：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna® Cell Ready 裂解模块 |

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，实验流程简洁，仅需 15 分钟即可有效完成细胞裂解、RNA 释放并同时去除基因组 DNA。可将多达 2 µl 裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞的 RNA）用于下游 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

 

产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3032S     -20    
        Luna Cell Ready Lysis Buffer B8036AVIAL -20 2 x 1.4 ml 2 X
        Luna Cell Ready RNA Protection Reagent M0469AVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        Luna Cell Ready Protease M0473AVIAL -20 1 x 0.2 ml 25 X
        Luna Cell Ready Stop Solution B8037AVIAL -20 1 x 0.6 ml 10 X
       

      DNase I (RNase-free)

      		 M0474AVIAL -20 1 x 0.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 磷酸盐缓冲液（PBS）
    • 细胞
    • Eppendorf 管
    • PCR 联管
    • PCR 板
    • 移液器和移液枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Luna® Cell Ready Lysis Module (NEB #E3032)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3032

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents
    • Facilitating Detection of SARS-CoV-2 Directly from Patient Samples: Precursor Studies with RT-qPCR and Colorimetric RT-LAMP Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What cell lines are compatible with the Luna Cell Ready Lysis Module (NEB #E3032)?
    2. How many cells should I use for reliable detection?
    3. How many cells should I seed into cell culture plates to achieve optimal detection?
    4. Can cryopreserved cell lines or pelleted cells stored at -80°C be used with this kit? 
    5. How can lysis efficiency be determined?
    6. Why is it important to evaluate RNA damage or inhibition during cell lysis and one-step RT-qPCR detection?
    7. What is the “Luna Cell Ready RNA Protection Reagent” and when should it be used?
    8. Should I include a No-RT control reaction?
    9. Will the blue tracking dye interfere with detection?
    10. Is cell washing prior to lysis necessary?
    11. Which lysis format should I use?
    12. What protocol should be used for cell lysis? Can cells be lysed at room temperature or using a short protocol?
    13. Can I use the cell lysates generated from the Luna Cell Ready Lysis Module for two-step RT-qPCR? 
    14. When using cell lysates generated from Luna Cell Ready Lysis Module, can RT-qPCR experiments be set up at room temperature?
    15. How much cell lysate should I use as input? (NEB #3030)
    16. Why does the Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit contain more RT-qPCR reactions than lysis reactions?
    17. If either the Luna Cell Ready Lysis Module or Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit runs out, can I order them separately?
    18. How can I obtain more technical help related to Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit?

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒为直接探针法 RNA 检测和定量提供了所有必要的组分，且无需进行 RNA 提取和纯化。Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒包含两个模块：1）Luna Cell Ready 裂解模块（NEB #E3032S）和 2）Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB #E3006L）。

细胞培养常替代活体生物用于分析基因表达或治疗反应。传统上，人们通过柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。裂解模块包含独特的 Luna Cell Ready RNA 保护试剂，可在细胞裂解过程中保持 RNA 完整性。50 µl 裂解体系下可对 10 – 100,000 个细胞进行裂解反应。可将多达 2 µl 的裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞的 RNA）用于下游 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使得整个流程可视化。

Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可兼容大多数实时荧光定量仪器的多个通道，针对目标 RNA 进行探针法实时定量分析。在该试剂盒中，联合使用热启动 Taq DNA 聚合酶与新型 Luna WarmStart 反转录酶，通过适配体可逆抑制来双重控制酶活性。Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可以直接对 Luna Cell Ready 裂解模块制备的细胞裂解物中的 RNA 转录本进行检测和定量（单重或多重反应）。

兼容 Luna Cell Ready 裂解模块的细胞系如下表所示。这些细胞进行 5 个 10 倍梯度稀释（在 50 µl 体系中裂解 10 – 100,000 个细胞），并取 1 µl 裂解物在 20 µl 体系中进行一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外，上述裂解模块经测试也可用于一些昆虫细胞系。

表 1：验证过的细胞系
 

细胞系 特性 种属 50 μl 裂解体系中的细胞数量
A549 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
HEK293 贴壁培养 人肾脏细胞 10 – 100,000
HeLa 贴壁培养 人子宫颈腺癌细胞 10 – 100,000
HepG2 贴壁培养 人肝脏癌细胞 10 – 1,000
NCI-H460 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
SK-N-SH 贴壁培养 人脑成神经细胞瘤细胞 10 – 10,000
U2Os 贴壁培养 人骨骼骨肉瘤细胞 10 – 100,000
Jurkat 悬浮培养 人 T 淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
K-562 悬浮培养 人成淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
图 1：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒提供了直接从培养细胞（50 µl 体系可裂解高达 100,000 个细胞）中进行 RNA 检测和定量的所有必要组分。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。可将多达 2 µl 裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞的 RNA）用于下游 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。
图 2：Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可直接对浓度范围跨越 5-log 的细胞裂解物进行灵敏精准的 RNA 定量。

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

梯度稀释的 HeLa 细胞（100,000 – 10）使用标准反应条件（37℃ 裂解 10 分钟，25℃ 灭活 5 分钟），在 50 µl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB #E3032）中裂解。使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB #E3006），加入 1 μl 细胞裂解物（相当于在 20 µl RT-qPCR 反应体系中加入 0.2 – 2,000 个细胞）对目的基因进行定量，对每个浓度的样品都做了重复。结果展示了两个高丰度靶标：β-actin（Texas Red）和 GAPDH（FAM），一个低丰度靶标：RPL32（HEX）的多重检测结果（A）和单重检测结果（B）。图中显示了相应的扩增效率（E）和线性关系（R2）。（C）对三个靶标多重和单重检测的 Cq 值重叠，证明了这些结果的一致性。
图 3：Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可对 5-log 细胞浓度范围的样品进行精准可靠的 RNA 定量，与提纯后 RNA 获得的结果相当。
Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 |
梯度稀释的 A549 细胞（100,000 – 10）使用标准反应条件（37℃ 裂解 10 分钟，25℃ 灭活 5 分钟），在 50 µl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB #E3032）中裂解。也可使用柱提法 RNA 提取试剂盒提纯 RNA。A：使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB＃E3006），将 1 μl 细胞裂解物（实心圆，左）或纯化的 RNA（空心圆，右）作为起始样本（相当于 20 µl RT-qPCR 反应体系中加入 0.2 – 2,000 个细胞），对目的基因进行定量，对每个样品浓度都做了重复实验。在 5-log 细胞起始加入量范围内，检测高丰度靶标 β-actin 和两个低丰度靶标 ARF3 和 Tubulin 的结果如图所示。每个靶标的扩增效率（E）在图中左下方显示。
图 4：Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒的扩增效率及灵敏度均优于其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒。
Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 |
梯度稀释的 A549 细胞（100,000 – 10）使用标准反应条件，在 50 µl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB #E3032）中裂解。或者，参照相应厂家产品说明书，使用市售的 Bio-Rad（SingleShot™ Probes One-Step Kit for Cell Lysis and RT-qPCR，#172-5070）、Qiagen（FastLane Cell Probe Kit，#216413）和 Thermo Fisher（Cells-to-CT 1-Step TaqMan Kit，A25603）试剂盒，裂解同样数量的细胞。然后使用每个试剂盒中的一步法 RT-qPCR 模块，加入 1 μl 细胞裂解物（相当于 20 µl RT-qPCR 反应体系中加入 0.2 – 2,000 个细胞），对目的基因进行定量，对每个浓度的样品都做了重复。在 5-log 浓度范围内，使用各试剂盒对β-actin（Tye）、GAPDH（FAM）和 RPL32（Cy5）进行多重扩增检测，结果如图所示。为了使结果标准化，将总荧光值的 10%（Tye）、5%（FAM）、15%（Cy5）设置为阈值。图中显示了扩增效率（E）及最高与最低起始量的 Cq 值。
产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3031S     -20    
        Luna Cell Ready Lysis Buffer B8036AVIAL -20 2 x 1.4 ml 2 X
        Luna Cell Ready RNA Protection Reagent M0469AVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        Luna Cell Ready Protease M0473AVIAL -20 1 x 0.2 ml 25 X
        Luna Cell Ready Stop Solution B8037AVIAL -20 1 x 0.6 ml 10 X
       

      DNase I (RNase-free)

      		 M0474AVIAL -20 1 x 0.5 ml 10 X
        Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix M3002LVIAL -20 1 x 0.5 ml 20 X
        Luna® Universal Probe One-Step Reaction Mix M3006SVIAL -20 5 x 1 ml 2 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 3 x 1.5 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 磷酸盐缓冲液（PBS）
    • 靶标特异性引物
    • 细胞
    • Eppendorf 管
    • PCR 联管
    • PCR 板
    • qPCR 仪器
    • 移液器和移液枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Luna® Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit (NEB #E3031)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3031

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What cell lines are compatible with the Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit (NEB #3031)?
    2. How many cells should I use for reliable detection?
    3. How many cells should I seed into cell culture plates to achieve optimal detection?
    4. Can cryopreserved cell lines or pelleted cells stored at -80°C be used with this kit? 
    5. How can lysis efficiency be determined?
    6. Why is it important to evaluate RNA damage or inhibition during cell lysis and one-step RT-qPCR detection?
    7. What is the “Luna Cell Ready RNA Protection Reagent” and when should it be used?
    8. Should I include a No-RT control reaction?
    9. Will the blue tracking dye interfere with detection?
    10. Is cell washing prior to lysis necessary?
    11. Which lysis format should I use?
    12. What protocol should be used for cell lysis? Can cells be lysed at room temperature or using a short protocol?
    13. When using cell lysates generated from Luna Cell Ready Lysis Module, can RT-qPCR experiments be set up at room temperature?
    14. How much cell lysate should I use as input? (NEB #3031)
    15. Can I use the cell lysates generated from the Luna Cell Ready Lysis Module for two-step RT-qPCR? 
    16. Why does the Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit contain more RT-qPCR reactions than lysis reactions?
    17. If either the Luna Cell Ready Lysis Module or Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit runs out can I order them separately?
    18. How can I obtain more technical help related to Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit?

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒为直接染料法 RNA 检测和定量提供了所有必要的组分，且无需进行 RNA 提取和纯化。Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒包括：1）Luna Cell Ready 裂解模块（NEB＃E3032S）和 2）Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB＃E3005L）。

细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。裂解模块包含独特的 Luna Cell Ready RNA 保护试剂，可在细胞裂解过程中保持 RNA 完整性。50 µl 裂解体系下可对 10 – 100,000 个细胞进行裂解反应。2 µl 裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞的 RNA）即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使整个加样流程可视化。

Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒兼容大多数实时荧光定量仪器的 SYBR®/FAM 荧光通道，可对靶标 RNA 序列执行染料法实时定量分析。在该试剂盒中，联合使用热启动 Taq DNA 聚合酶与新型 Luna WarmStart 反转录酶，通过适配体可逆抑制来双重控制酶活性。Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒可以直接将 Luna Cell Ready 裂解模块制备的细胞裂解物中的 RNA 转录本进行检测和定量。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 个 10 倍梯度稀释（在 50 µl 体系中裂解 10 – 100,000 个细胞），并取 1 µl 裂解物在 20 µl 体系中进行一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果显示在最后一列。此外，经测试一些昆虫细胞系也能使用上述裂解液裂解。

表 1：经验证过的细胞系
 

细胞系 性质 属 50 μl 体系可裂解的细胞数
A549 粘着型 智人、肺、癌 10 – 100,000
HEK293 粘着型 智人、肾 10 – 100,000
HeLa 粘着型 智人、子宫颈、腺癌 10 – 100,000
HepG2 粘着型 智人、肝脏、癌 10 – 1,000
NCI-H460 粘着型 智人、肺、癌 10 – 100,000
SK-N-SH 粘着型 智人、大脑、成神经细胞瘤 10 – 10,000
U2Os 粘着型 智人、骨骼、骨肉瘤 10 – 100,000
Jurkat 悬垂型 智人、T 淋巴细胞、白血病 10 – 100,000
K-562 悬垂型 智人、成淋巴细胞、白血病 10 – 100,000
图 1：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒提供了直接从培养细胞（50 µl 体系可裂解高达 100,000 个细胞）中进行 RNA 检测和定量的所有必要组分。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞中的 RNA）即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。
图 2：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒可直接对 5 个 10 倍梯度稀释细胞的裂解物进行灵敏精准的 RNA 定量

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

梯度稀释的 HeLa 细胞（10 – 100,000）使用标准反应条件（37℃ 裂解 10 分钟，25℃ 灭活 5 分钟），在 50 μl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB＃E3032）中裂解。使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB＃E3005），将 1 μl 细胞裂解物作为起始量（相当于 20 μl RT-qPCR 反应体系中的 0.2 – 2,000 个细胞）对目的基因（GOI）进行定量，每个起始量浓度都做了重复。结果展示了一个高频靶标（A）：β-actin 和一个低频靶标（B）：SMG1。右图展示了扩增效率（E）和线性关系（R2）。
图 3：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒与提纯 RNA 均可对 5 个 10 倍梯度稀释的细胞起始量进行精准可信的 RNA 定量

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

梯度稀释的 A549 细胞（10 – 100,000）使用标准反应条件（37℃ 裂解 10 分钟，25℃ 灭活 5 分钟），在 50 µl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB＃E3032）中裂解。也可使用柱提法 RNA 提取试剂盒提纯 RNA。A. 使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒（NEB＃E3005），将 1 μl 细胞裂解物（实心圆）或纯化的 RNA（空心圆）作为起始量（相当于 20 µl RT-qPCR 反应体系中的 0.2 – 2,000 个细胞）对目的基因（GOI）进行定量，每个起始量浓度都做了重复。左图：在 5 个 10 倍梯度稀释的细胞起始量中检测高频靶标 β-actin 和两个低频靶标 ARF3 和 Tubulin。每个靶标的扩增效率（E）在图中左下方显示。B. 根据（A）中 5 个 10 倍梯度稀释的细胞起始量计算每次稀释时（ΔCq（GOI））相对于 β-actin 的 Cq 值。平均 Cq 通过横线指示。
图 4：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒的扩增效率及灵敏度均优于其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒。

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

梯度稀释的 A549 细胞（10 – 100,000）使用标准反应条件，在 50 µl 的 Luna Cell Ready 裂解体系（NEB #E3032）中裂解。或者，参照相应厂家产品说明书，使用市售的 Bio-Rad（SingleShot SYBR Green 一步法试剂盒，#172-5095）、Qiagen（FastLane Cell SYBR Green 试剂盒，#216213）和 Thermo Fisher（Cells-to-CT 一步法 PowerSYBR Green 试剂盒，A25600）试剂盒，裂解同样数量的细胞。然后使用每个试剂盒中的一步法 RT-qPCR 模块，将 1 μl 细胞裂解物作为起始量（相当于 20 µl RT-qPCR 反应体系中 0.2 – 2,000 个细胞），对目的基因进行定量，每个浓度的样品都做了重复。对于所有试剂盒，5 个 10 倍梯度稀释的细胞起始量均显示了高频靶标 β-actin 和低频靶标 RPL32 和 Tubulin 的扩增。为了使结果标准化，将总荧光的 12% 设置为阈值。图中显示了扩增效率（E）及最高与最低起始量的 Cq 值。
图 5：对 24 个靶标测试显示，Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒与其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒相比，灵敏度最高。

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 |

使用标准反应条件或按照厂商产品说明书使用市售试剂盒，在 50 µl Luna Cell Ready 裂解反应（NEB #E3032）中，对大约 2,500 个 A549 细胞进行裂解。每个试剂盒做两个生物重复。然后使用每个试剂盒中的一步法 RT-qPCR 模块，将 1 μl 细胞裂解物作为起始量（相当于 20 µl RT-qPCR 反应中 50 个细胞），对 24 个目标基因进行定量，每个生物样品均做重复。结果显示了 NEB（实心橙色圆圈）、BioRad（空心正方形）、Qiagen（空心三角形）和 Thermo Fisher（十字形）的平均 Cq。为了使结果标准化，将总荧光的 12% 设置为阈值。Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒显示了不同表达水平下 23/24 的基因 Cq 值最早，平均比 Bio-Rad 快 2.3 Cq，比 Qiagen 快 3.8 Cq，比 Thermo Fisher Scientific 快 3.6 Cq。
产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3030S     -20    
        Luna Cell Ready Lysis Buffer B8036AVIAL -20 2 x 1.4 ml 2 X
        Luna Cell Ready RNA Protection Reagent M0469AVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        Luna Cell Ready Protease M0473AVIAL -20 1 x 0.2 ml 25 X
        Luna Cell Ready Stop Solution B8037AVIAL -20 1 x 0.6 ml 10 X
       

      DNase I (RNase-free)

      		 M0474AVIAL -20 1 x 0.5 ml 10 X
        Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix M3002LVIAL -20 1 x 0.5 ml 20 X
        Luna® Universal One-Step Reaction Mix M3005SVIAL -20 5 x 1 ml 2 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 3 x 1.5 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 磷酸盐缓冲液（PBS）
    • 目标特异性引物
    • 细胞
    • Eppendorf 管，PCR 联管
    • PCR 板
    • qPCR 仪器
    • 移液器和移液枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Luna® Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit Protocol (NEB #E3030)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3030

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What cell lines are compatible with the Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit (NEB #E3030)?
    2. How many cells should I use for reliable detection?
    3. How many cells should I seed into cell culture plates to achieve optimal detection?
    4. Can cryopreserved cell lines or pelleted cells stored at -80°C be used with this kit? 
    5. How can lysis efficiency be determined?
    6. Why is it important to evaluate RNA damage or inhibition during cell lysis and one-step RT-qPCR detection?
    7. What is the “Luna Cell Ready RNA Protection Reagent” and when should it be used?
    8. Should I include a No-RT control reaction?
    9. Will the blue tracking dye interfere with detection?
    10. Is cell washing prior to lysis necessary?
    11. Which lysis format should I use?
    12. What protocol should be used for cell lysis? Can cells be lysed at room temperature or using a short protocol?
    13. When using cell lysates generated from Luna Cell Ready Lysis Module, can RT-qPCR experiments be set up at room temperature?
    14. How much cell lysate should I use as input? (NEB #3030)
    15. Can I use the cell lysates generated from the Luna Cell Ready Lysis Module for two-step RT-qPCR? 
    16. Why does the Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit contain more RT-qPCR reactions than lysis reactions?
    17. If either the Luna Cell Ready Lysis Module or Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit runs out, can I order them separately?
    18. How can I obtain more technical help related to Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit?

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒经过优化，适用于水解探针法的 SARS-CoV-2 实时 RT-PCR 检测。在同一管中，RNA 首先由反转录酶转化为 cDNA，然后使用 DNA 依赖型 DNA 聚合酶扩增 cDNA，从而通过实时或定量 PCR（qPCR）实现 RNA 定量。探针法 qPCR/RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5′→3′ 核酸外切酶活性，将淬灭的靶标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量 PCR 每个循环中的 DNA 扩增。通过荧光信号显著超过背景荧光所经历的循环数，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度。

图 1：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒组分

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 |

图 2：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒可在一个反应中同时检测 N 基因两个区域和人源 RNase P 基因

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A. SARS-CoV-2 的两组引物/探针序列基于 CDC 提供的序列，其中探针改为两种荧光标记（N1：HEX，N2：FAM）。

B. RNase P 内标包含 Cy5 标记的探针和重新设计的反向引物。该引物的跨外显子设计，避免了人基因组 DNA（含有 2.4 kb 内含子）的扩增干扰。

SARS-CoV-2 引物/探针混合液包含 SARS-CoV-2 病毒中 N 基因两个区域的专用引物和探针 [基于美国疾控中心（CDC）提供的序列]。探针经修饰，包含不同的荧光团（N1：HEX；N2：FAM），可以在实时仪器的两个不同通道上同时进行观察。为了确保检测样品的完整性和无抑制物，还提供一套用于扩增人源 RNase P 基因的内标（IC）引物和探针。该靶基因的反向引物与 CDC 的设计不同，修改为跨外显子序列，以降低残留基因组 DNA 的扩增背景。IC 的扩增可在 Cy5 通道观测。产品同时还提供阳性对照（PC）模板（含有 SARS-CoV-2 N 基因的质粒）。

该试剂盒包含 Luna 探针一步法 RT-qPCR 4X 混合液（含 UDG）（NEB #M3019），支持更大的上样量和混合样品池检测策略，对灵敏度和特异性的影响极小。该预混液包含一步法 RT-qPCR 的所有组分，以及独特的惰性参比染料，可与多种 qPCR 仪器兼容，包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器。独具特色的是：预混液还包含防止交叉污染的热敏 UDG 和 dUTP，以及有助于观察反应体系建立的非荧光可见示踪染料。该示踪染料与 qPCR 常用荧光团的光谱没有重叠，因此不会干扰实时检测。

图 3：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限
比 TaqPath™ 1-Step RT-qPCR Master Mix CG 更低

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 |

将下述两种试剂盒进行检测下限（LOD）比较：使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对 2019-nCoV_N1 靶标（HEX）和 2019-nCoV_N2 靶标（FAM）进行多重 RT-qPCR 检测，实验设置参照 E3019 产品说明书中的反应和循环条件；使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG 对 2019-nCoV_ N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重 RT-qPCR 检测，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。结果显示：Luna 试剂盒对两个靶标的检测下限为 5 拷贝/反应，而 TaqPath 为 10 拷贝/反应。
图 4：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒适用于纯化 RNA 的混合样品池检测

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通过将一份 2 µl 的模拟阳性样品（10 拷贝的 Twist 合成 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA）与四份 2 µl 的模拟阴性样品（仅含 10 ng Jurkat 总 RNA）混合，制备出包含五份样品的混合样品池。将混合样品池（10 µl）与单独样品（2 µl，含 10 拷贝 N 基因和 10 ng Jurkat 总 RNA）进行性能比较。实验仪器为 Applied Biosystems 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。N1 和 N2 靶标的扩增曲线显示，单独和掺入混合样品池的阳性样品 Cq 值相似。由于混合样品池中人源总 RNA 量是单独样品的 5 倍，因此正如预期，混合样品池 RNase P 基因的 Cq 值更小。
图 5：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限（LOD）

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通过 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对多种 SARS-CoV-2 RNA 对照样品中的 2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）靶标进行多重 RT-qPCR 检测，获得该试剂盒的检测下限（LOD）。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中（图 A）。两位实验人员同时使用三种仪器进行平行测试（96 孔板，20 µl 反应体系）：Applied Biosystems（ABI）7500 Fast Real-Time instrument、ABI QuantStudio™ 6 Flex Real-Time PCR system，以及 Bio-Rad CFX instrument。结果显示：Twist RNA 的检测下限均为 5 拷贝/反应。此外还测试了其它样品类型（图 B）：源自 ATCC 的 SARS-CoV-2 基因组 RNA（ATCC® VR-1986D™）、NIST（Fragment 1 – Includes SARS-CoV-2 sequence: 25949-29698 of isolate USA-WA1/2020），以及 SeraCare AccuPlex™ SARS-CoV-2 Verification Panel V2（0505-0132）。上述 RNA 均由 Monarch 总 RNA 小量提取试剂盒（NEB# T2010）提取。所有 RNA 样品均掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA，使用 ABI 7500 Fast Real-Time instrument 检测。假设 RNA 提取的回收率为 100%，则各样品检测下限为：ATCC 的 SARS-CoV-2 基因组 RNA 为 2.5 GE（genomic copy equivalent，基因组拷贝当量）、NIST SARS-CoV-2 测试样品为 1×107 倍稀释、SeraCare AccuPlex 样品为 15 拷贝。
图 6：与 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG 相比，Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）对 SARS-CoV-2 N2 靶标的检测性能更好

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A.使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）对 2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）靶标进行单重 RT-qPCR 检测，实验设置参照 E3019 产品说明书中的反应和循环条件。
B.使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG 对 2019-nCoV_N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）靶标进行单重 RT-qPCR 检测，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中，实验评估了样品 5-log 浓度范围扩增结果。实验仪器为 Applied Biosystems 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。在上述条件下，Luna 和 TaqPath 对 N1 靶标的扩增结果都很好。对于 N2 靶标，尽管 TaqPath 可检测 10 个拷贝样品，但线性度并不理想，而 Luna 线性度更好，且 Cq 的值出现更早。

在 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）中，联合使用 Taq 热启动 DNA 聚合酶与新型 WarmStart 反转录酶，通过适配体可逆抑制来双重控制酶活性。这种温控活化机制可避免热循环前的非特异扩增，从而让在室温下建立体系更安全。经改造的 Luna WarmStart 反转录酶具备更高的热稳定性，最佳反应温度为 55℃。

图 7：Luna RT-qPCR 预混液的室温稳定性让实验流程更灵活

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使用 Luna 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）对 2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重（SP）和多重（MP）RT-qPCR 检测，实验设置参照 NEB #E3019 产品说明书中的反应和循环条件。使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG 对 2019-nCoV_N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）靶标进行单重 RT-qPCR 检测，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中，实验评估了样品 5-log 浓度范围（100,000 – 10 拷贝）的扩增结果。上机前，将 RT-qPCR 反应分别在室温下温育 0、2、5、24 小时。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 μl 反应体系）。结果显示：Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 预混液温育 0 至 24 小时的实验结果一致，而 TaqPath 温育 2 小时后，Cq 值延迟 ≥ 1，实验效果随温育时间的延长而下降。
 
产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3019S     -20    
        Luna® Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG M3019SVIAL -20 1 x 0.53 ml 4 X
        SARS-CoV-2 Positive Control (N gene) N2117SVIAL -20 1 x 0.05 ml Not Applicable
        SARS-CoV-2 Primer/Probe Mix (N1/N2/RP) (10X) S0631AVIAL -20 1 x 0.215 ml 10 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E3019L     -20    
        Luna® Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG M3019SVIAL -20 5 x 0.53 ml 4 X
        SARS-CoV-2 Positive Control (N gene) N2117SVIAL -20 1 x 0.05 ml Not Applicable
        SARS-CoV-2 Primer/Probe Mix (N1/N2/RP) (10X) S0631AAVIAL -20 1 x 1.06 ml 10 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 5 x 1.5 ml Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • 支持高通量流程，包括 384 孔板测试模式（与低反应体系兼容）
    • 预混液包含的 UDG 和 dUTP 可防止交叉污染，减少污染风险
    • 经优化的引物/探针混合液可提高检测能力和灵敏度
    • 双重 WarmStart/热启动酶剂型为室温下建立反应体系及保持 24 小时的持久稳定打下基础
     

  • 相关产品

    相关产品

    • M3019 Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG
    • N2117 SARS-CoV-2 Positive Control N gene

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Protocol (NEB #E3019)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3019

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents
    • The Luna 4X RT-qPCR Mix and Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit enable high throughput, automated detection workflows
    • Primer Monitor: an online tool to track SARS-CoV-2 variants that may impact primers used in diagnostic assays

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Do different SARS-CoV-2 variants impact the effectiveness of the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit?
    2. What components are included in the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit?
    3. How many test samples can be run on a 96-well plate?
    4. Does the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit enable carryover prevention/contamination reduction?
    5. Can I set up the SARS-CoV-2 assay at room temperature?
    6. How much sample can be added to the reaction as input for the SARS-CoV-2 assay?
    7. What targets do the SARS-CoV-2 Primer/Probe mix detect? How were these primers chosen?
    8. Is the sequence of the RNase P primer/probe set the same as the CDC?
    9. What is the SARS-CoV-2 Positive Control included in the kit?
    10. How are results interpreted in the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit?
    11. How stable is the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit primer mix?
    12. What types of samples/materials are compatible with the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit?
    13. What instruments are compatible with the Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit? 
    14. What are the sequences for the primers and probes included in the kit?
    15. Can I prepare a plate in advance?

质控、安全 & 法规

  • 质控分析

    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • E3019S_L_v1
    • E3019S_L_v2

  • CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • E3019L_v1_10092225
    • E3019S_v1_10092230
    • E3019L_v1_10104995
    • E3019S_v1_10104994
    • E3019S_v1_10108769
    • E3019L_v1_10108770
    • E3019L_v1_10111841
    • E3019L_v1_10121084
    • E3019S_v1_10123078
    • E3019L_v1_10125551
    • E3019L_v1_10130846
    • E3019L_v1_10132125
    • E3019L_v1_10134716
    • E3019L_v1_10134875
    • E3019L_v1_10135262
    • E3019S_v1_10133078
    • E3019L_v1_10137486
    • E3019L_v1_10139525
    • E3019L_v1_10139570
    • E3019L_v1_10140882
    • E3019L_v1_10141276
    • E3019L_v1_10141412
    • E3019L_v1_10141865
    • E3019S_v1_10143642
    • E3019L_v1_10146113
    • E3019S_v1_10149316
    • E3019L_v1_10164055
    • E3019S_v1_10164056
    • E3019S_v1_10166257
    • E3019L_v2_10166258
    • E3019S_v2_10179736
    • E3019S_v2_10183729
    • E3019L_v2_10184734
    • E3019S_v2_10208161
    • E3019L_v2_10225979
    • E3019S_v2_10231235

  • SDS

    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG
    • SARS-CoV-2 阳性对照（N 基因）
    • SARS-CoV-2 Primer/Probe Mix (N1/N2/RP) (10X)
    • Nuclease-free Water