4057-050-Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 500g

产品型号4057-050

品       牌沃特曼

产品简介

DE弱(带电量依赖于pH值)阴离子交换剂,基于二乙胺乙基(DEAE)的叔胺功能基团。QA52是强(带电量不依赖于pH值)阴离子交换介质,包含有季胺基团。
世界上使用Z广泛的DEAE纤维素,用于带有低至高负电荷的生物聚合物,高流速,高分辨率
“Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 500g “

详情介绍

纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分guang光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分guang光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分guang光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分guang光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。

Whatman阴离子交换剂

产品型号

品       牌沃特曼

产品简介

DE阴离子交换剂的二乙胺乙基(DEAE)季胺基团,QA52是强阴离子交换介质。
公司主营产品:实验室仪器设备,细胞,Elisa试剂盒, 生物试剂,标准品,培养基,血清,抗体,耗材等系列产品,现货供应,物美价廉。欢迎客户“Whatman阴离子交换剂”详细说明书。

详情介绍

DE23(纤维状DEAE-纤维素)
在去除细末后流速加快,适合用于负极生物聚合物
 
DE32(干燥细颗粒DEAE-纤维素)
功能如同DE52,但需预处理
DE51(预溶胀细颗粒DEAE-纤维素)
低全面净电荷。用于带高负极蛋白质、核酸,适合等度洗脱系统。
DE52(预溶胀细颗粒DEAE-纤维素)
世上用得zui广泛的DEAE纤维素填料,用于带低到高负极电荷生物聚合物,呈现优异的分辨率和良好的流速。
DE53(预溶胀细颗粒DEAD-纤维素)
部分季铵化DEAE阴离子交换剂,具有比DE52更高取代和载量,能与DE51和DE52同时使用。
QA52(预溶胀,微粒)
强碱性,季铵化离子交换介质,适度取代,高蛋白载量。全离子化,在任何PH条件下颗粒不变形,适合高PH应用。

技术参数-阴离子交换填料

物理形态   功能团    正常PH范围  小离子电量        蛋白容量          g离子交换剂
                                  Meg/dg(4)     干克      柱体积    柱床体积ml
(mg/dg*)  (mg/ml)
干纤维
DE23    二乙氨乙基    2-9.5       0.88-1.08        425b        60        0.15
干微晶
DE32    二乙氨乙基    2-9.5       0.88-1.08        700 b       140      0.20
预溶胀细结晶物
DE51    二乙氨乙基    2-9         0.20-0.25        175a         30       1.2 
DE52    二乙氨乙基    2-9.5      0.88-1.08         700b         130     0.9
DE53    二乙氨乙基    2-12       1.8-2.2           750 b        150     1.05
QA52    季铵          2-12       1.1               750b         150     1.2
*dg=千克
1蛋白体重:
a0.005M PH 8.5磷酸缓冲液-牛血清白蛋白
b0.01M PH 8.5磷酸缓冲液-牛血清白蛋白
订货信息-阴离子交换剂DEAE和QA纤维
目录号         品名       描述                                   尺寸
4053-010        DE23      纤维状DEAE-纤维素                      100 g
4053-025        DE23      纤维状DEAE-纤维素                      250 g
4055-010        DE32      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                100g
4056-050        DE51      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-050        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-200        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4058-050        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4058-200        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4065-050        QA52      季铵                                   500g
4065-200        QA52      季铵                                   2kg

14022169-Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg

产品型号14022169

品       牌沃特曼

产品简介

DE弱(带电量依赖于pH值)阴离子交换剂,基于二乙胺乙基(DEAE)的叔胺功能基团。QA52是强(带电量不依赖于pH值)阴离子交换介质,包含有季胺基团。世界上使用Z广泛的DEAE纤维素,用于带有低至高负电荷的生物聚合物,高流速,高分辨率.“Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg “

详情介绍

纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃

订货信息-阴离子交换剂DEAE和QA纤维

目录号         品名       描述                                                  尺寸
4053-010        DE23      纤维状DEAE-纤维素                        100 g
4053-025        DE23      纤维状DEAE-纤维素                         250 g
4055-010        DE32      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                100g
4056-050        DE51      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-050        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-200        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4058-050        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4058-200        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4065-050        QA52      季铵                                                   500g
4065-200        QA52      季铵                                                   2kg

 

4057-060-Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 100g

产品型号4057-060

品       牌沃特曼

产品简介

DE弱(带电量依赖于pH值)阴离子交换剂,基于二乙胺乙基(DEAE)的叔胺功能基团。QA52是强(带电量不依赖于pH值)阴离子交换介质,包含有季胺基团。
世界上使用Z广泛的DEAE纤维素,用于带有低至高负电荷的生物聚合物,高流速,高分辨率
“Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 100g “

详情介绍

纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4–30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。