上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
快速 CIP 是重组表达的热敏小牛肠碱性磷酸酶（CIP）。快速 CIP 可非特异性催化 DNA 和 RNA 的 5′ 和 3′ 末端磷酸单酯的去磷酸化。另外，还水解核糖核苷酸和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。快速 CIP 可用于各种 DNA 或 RNA 末端去磷酸化的实验。在克隆中，对线性化质粒 DNA 去磷酸化，可防止自连。该酶可以快速作用于 5′ 突出端、5′ 凹陷端和平末端，反应时间仅需 10 分钟。快速 CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP分析。
与不可热失活的野生型 CIP 相比，快速 CIP 80℃ 加热 2 分钟即可完全且不可逆地失活。°因此在连接或末端标记前无需去除快速 CIP。
产品来源
小牛肠碱性磷酸酶基因克隆自小牛肠粘膜并在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。
- 产品类别:
- Phosphatases Products,
- RNA Modification
- 应用:
- Dephosphorylation,
- Fast Cloning: Accelerate your cloning workflows with reagents from NEB
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分：
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
M0525V -20 Quick CIP M0525VVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
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M0525S -20 Quick CIP M0525SVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
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M0525L -20 Quick CIP M0525LVIAL -20 1 x 1 ml 5,000 units/ml rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
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特性和用法
单位定义
1 单位是指在 1 ml 反应体系中，37℃ 条件下，1 分钟内水解 1 μmol 对硝基苯磷酸盐（PNPP）（NEB #P0757）所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37°CrCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25°C)贮存溶液
25 mM Tris-HCl
1 mM MgCl2
0.1 mM ZnCl2
50% Glycerol
pH 7.5 @ 25°C热失活
80°C for 2 minutes
单位活性检测条件
1 M 二乙醇胺-HCl（pH 9.8）、0.5 mM MgCl2、50 mM 对硝基苯磷酸盐。这些条件仅用于定量酶活性。
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优势和特性
Features
- 快速且不可逆的热失活特性，节省纯化步骤
- 贮存稳定性优于野生型酶
- 快速建立反应（无需锌等额外添加剂）并缩短温育时间
- 反应条件灵活（兼容任何限制性内切酶缓冲液，无需纯化）
- 所需酶量更少（活性更高），从而降低每次反应的成本
- 无需多种磷酸酶（快速 CIP 可以从 DNA、RNA 和 dNTPs 中去除 5′ 和 3′ 磷酸基）
- 降解 PCR 产物中未掺入的 dNTP，提高 DNA 测序和 SNP 分析质量
- 重组酶保证纯度、批间一致性和更高性价比
应用特性
- DNA 和 RNA 的 5′ 与 3′ 末端的去磷酸化。
- 克隆载体 DNA 去磷酸化，防止载体自连。
- 在使用 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）标记末端前对 DNA 进行去磷酸化。
- 在测序或 SNP 分析前去除 PCR 反应中的 dNTP。
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注意事项
- 快速 CIP 与大多数碱性磷酸酶一样，是一种 Zn2+ 和 Mg2+ 依赖型酶。在我们的制剂中，锌原子被紧密结合在活性中心，因此无需补充锌或其它添加剂。
- 快速 CIP 在 1X NEBuffer 1.1、2.1、3.1 以及 NEBuffer 1、2、3、4 和用于 EcoRI 的 NEBuffer 中均有活性。
- 单价盐可提高快速 CIP 的活性。
- 金属螯合剂（如 EDTA）、无机磷酸盐和磷酸盐类似物会抑制快速 CIP。
- 存在还原剂（DTT、β-巯基乙醇）时快速 CIP 活性降低。
- 快速 CIP 是同源二聚体。单体分子量为 56 kDa。
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参考文献
- Weissig, H. et al (1993). Biochem. J. 290, 503-508.
- Manes, T (1998). J. Biol. Chem. 273, 23353-23360.
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- Protocol for Dephosphorylation of 5′ ends of DNA using Quick CIP (NEB #M0525)
- Enzymatic PCR Cleanup Protocol (NEB #M0525)
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使用指南
- Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
工具 & 资源
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选择指南
- Phosphatase Selection Chart
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Web 工具
- NEBcloner®
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- Which alkaline phosphatase, Quick CIP, rSAP or Antarctic Phosphatase works best?
- The number of colonies that do not contain an insert seems high. How can I tell if Quick CIP worked?
- What phosphate groups are removed by rSAP, Quick CIP, or Antarctic Phosphatase (AnP)?
- Does the DNA need to be purified after treatment with Quick CIP?
- What is the effect of metal chelators, inorganic phosphate and phosphate analogs on Quick CIP activity?
- What is the effect of monovalent salts on Quick CIP activity?
- What is the effect of reducing agents on Quick CIP activity?
- Will Quick CIP, rSAP or Antarctic Phosphatase (AnP) dephosphorylate proteins?
- Can Quick CIP be heat inactivated?
- Does the DNA need to be purified after a restriction digest and prior to the dephosphorylation step?
- Are the alkaline phosphatases active in NEBuffers?
- Cloning Problem: Too much background in the transformation step.
- Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?
