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SNAP-Cell® 阻断剂 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

SNAP-tag 蛋白标记体系能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 是一种基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）的小蛋白。SNAP-tag 的底物是苄基嘌呤和苄基氯嘧啶的衍生物。在标记反应中，底物取代苄基部分与 SNAP-tag 形成共价结合。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。SNAP-tag 质粒随附的说明书中描述了 SNAP-tag 融合蛋白的表达。SNAP-Cell 底物随附的说明书中描述了如何使用 SNAP-Cell 底物进行 SNAP-tag 融合蛋白标记。有关在使用 SNAP-tag 底物标记融合蛋白时，使用 SNAP-Cell® 阻断剂的信息如下所述。

图 1：SNAP-Cell 阻断剂分子结构（MW 338.2 g/mol）
 SNAP-Cell® 阻断剂 |
产品类别:
Blocking Agents Products,
SNAP-tag Substrates Products ,
Protein Labeling Products

应用:
SNAP Cell,
Pulse Chase,
In vivo Imaging,

Receptor Internalization,
Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • S9106S     -20    
        SNAP-Cell® Block S9106SVIAL -20 1 x 100 nmol Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 SNAP-tag 融合蛋白的细胞
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • 荧光显微镜及适用的滤光装置
    • DMSO

  • 注意事项

    1. 请注意，细胞中的蛋白会不断更新和再合成。在阻断细胞内所有现有的 SNAP-tag 融合蛋白后，同时会合成新的 SNAP-tag 融合蛋白分子，此蛋白分子将在与荧光 SNAP-tag 底物一起温育时被标记。这会给人一种阻断剂无效的错觉。为了最大限度地减少蛋白合成和蛋白运输的影响，必须使用放线菌酮处理细胞，并且与荧光 SNAP-tag 底物的温育必须在 4℃ 条件下进行。
    2. 贮存条件：SNAP-Cell 阻断剂应贮存在 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存）条件下。如果妥善贮存在 -20℃ 条件下，SNAP-Cell 阻断剂在干燥状态下至少可保持三年稳定；溶解在 DMSO 中时，至少可保持三个月稳定。
    3. 如需问题解决指南，请酌情参阅 SNAP-Cell 产品随附的说明书。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cellular Labeling (S9106)
    2. Labeling of Proteins in vitro (S9106)

  • 应用实例

    • AppNote_SNAP_Based_Pulse_Labeling_for_Analysis_of_Protein_Turnover_in_Living_Cells

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋处理至少 1 分钟整，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度及/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。

CLIP-Cell™ 阻断剂 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

CLIP-tag 蛋白标记系统能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。CLIP-tag 是一种基于人 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT）的蛋白。CLIP-tag 的底物是苄基胞嘧啶（benzylcytosine，BC）的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 CLIP-tag 的活性半胱氨酸共价结合，形成稳定的硫醚键。尽管 CLIP-tag 与 SNAP-tag® 基于相同的蛋白，苄基胞嘧啶底物是一类独立的底物，和 SNAP-tag 所识别的苄基鸟嘌呤底物不同。CLIP-tag 和 SNAP-tag 可同时用于同一细胞中两种蛋白的正交和互补标记。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达与 CLIP-tag 融合的目的蛋白；选择 CLIP-tag 底物进行标记融合蛋白。有关利用 CLIP-Cell 底物在标记融合蛋白时使用 BTC 的信息，请参阅本文说明。

图 1：CLIP-Cell 阻断剂结构（MW 286.1） CLIP-Cell™ 阻断剂 |
产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 CLIP-tag 融合蛋白的细胞
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • 荧光显微镜及适用的滤光装置
    • DMSO

  • 注意事项

    1. 贮存条件：CLIP-Cell 阻断剂应贮存于 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存）。如果 CLIP-Cell 阻断剂妥善贮存于 -20℃，干燥贮存的阻断剂至少可以保持稳定三年，溶解在 DMSO 中时至少可保持稳定三个月。
    2. 如需问题解决指南，请参阅 CLIP-Cell 产品随附的说明书。
    3. 请注意，细胞中的蛋白会不断更替和再合成。在阻断细胞内所有现有的 CLIP-tag 融合蛋白后，新的 CLIP-tag 融合蛋白分子可能会在此期间合成，并在与荧光 CLIP-tag 底物一起温育时被标记。这会给人一种阻断剂无效的错觉。为了最大限度地减少对蛋白合成和蛋白运输的影响，可使用放线菌酮处理细胞，并且在 4℃ 温育细胞与荧光 CLIP-tag 底物。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Use with CLIP-tag substrates (S9220)
    2. Labeling of Proteins in vitro (S9220)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the SNAP-tag®?
    2. How does it work?
    3. How specific is the binding of substrate to the SNAP-tag®?
    4. How does SNAP-tag labeling differ from using GFP fusion proteins?
    5. What linker type and length would you recommend?
    6. Can I clone my protein as a fusion to the N- or C-terminus of the tags?
    7. What is the smallest peptide and biggest protein you have cloned as SNAP-tag fusions?
    8. What is the solubility of SNAP-tag in insect and bacterial expression systems?
    9. What competent cell strains does NEB suggest for expression in E. coli?
    10. What competent cell E. coli strains are suitable for propagating SNAP-tag plasmids?
    11. Can SNAP-tag fusions be purified and refolded from inclusion bodies?
    12. Are substrates toxic to cells?
    13. Can cells expressing SNAP-tag be fixed prior to labeling?
    14. Can SNAP-tag be multiplexed with other protein labeling systems (GFP, Antibody)?
    15. Can you use SNAP-tag for in vivo FRET?
    16. Can cell-impermeable substrates be microinjected into cells, and how is the excess substrate exported?
    17. Does the SNAP-tag labeling reaction work in yeast?
    18. What happens to the fluorophore upon proteolysis?
    19. What conditions are recommended for SNAP-tag labeling in vitro?
    20. What conditions are incompatible with SNAP-tag labeling in vitro?
    21. Can SNAP-tag fusion proteins be labeled in a cell lysate?
    22. I have a compound that I would like to couple to a BG derivative. Where can I get advice?
    23. What is the difference between SNAP-tag and ACP-tag?
    24. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋至少 1 分钟，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度和/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。