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球状体·细胞透明化试剂
SCALEVIEW®-S4
SCALEVIEW®-S是组织透明化试剂。可通过使用SCALEVIEW®-S0 – SCALEVIEW®-SMt等六种产品进行组织透明化处理。
其中，可单独使用SCALEVIEW®-S4透明化球状体或细胞。只需将目标样品浸入SCALEVIEW®-S4即可。
◆特点
● 只需浸泡即可实现简单透明化
● 透明化耗时短（1日左右）
● 不需要特殊的设备
● 可配合荧光抗体标记和荧光素观察
◆T47D细胞球状体观察实例
Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
图1. SCALEVIEW®-S4透明化T47D细胞球体的图像示例（细胞核使用Hoechst染色）4）。
使用共聚焦显微镜Z-堆叠获得的球状体图像。
图2. T47D细胞球状体经诺考达唑处理后，使用组蛋白H3抗体的测量实例。
通过SCALEVIEW®-S4的透明化处理，可观察药物施用对球状体表面和内部的影响。
◆操作步骤图示
◆SCALEVIEW®-S4 Neurosphere的观察实例
数据提供：
国立研究开发法人理化学研究所
脑神经科学研究中心细胞技能探索技术研究组/ 光量子工学研究中心生命光学技术研究组 滨裕先生、星田哲志先生、宫脇敦史先生
协助：olympus 株式会社
Neurosphere的观察实例
（※试剂使用量推荐前处理和透明化均为各试剂：1.2 mL。※荧光抗体标记基于AbScale方案。）
| 固定 | 前处理 | ||||
| 灌注固定+固定 4%PFA/PBS(-) 【pH 7.6-7.8】 |
前处理1 SCALEVIEW®-S0 |
透明处理1 SCALEVIEW®-A2 |
透明处理2 8 M Urea Solution |
透明处理3 SCALEVIEW®-A2 | 洗净 deScale Solution |
| 4 ℃, 3 day | 37 ℃, 4 hr | 37 ℃, 4 hr |
37 ℃, 12 hr |
37 ℃, 4 hr | 4 ℃, 6 hr |
| 荧光抗体标记 | 透明化 | 观察 | ||||
|
Blocking 1% Blocking Reagent(Roche)/ PBS(-) |
抗体标记【例：标记Iba1抗体】 AbScale Solution |
洗净 AbScale Solution |
再固定 4% PFA/PBS(-)【pH 7.6-7.8】 |
洗净 deScale Solution |
透明化 SCALEVIEW®-S4 37 ℃，4 hr |
固定 SCALEVIEW®-S4 摇动1小时后固定* |
| 室温，2 hr | 37 ℃, >1 day |
室温, 2 hr ×1、 1 hr ×1 |
室温，1 hr | 4 ℃，3 hr | 37 ℃，4 hr | 室温 |
*透明化后，使用1.5％（wt / vol）琼脂糖嵌入并固定。
成年大鼠海马神经干细胞神经球状体的三维免疫荧光 —使用AbScale法—
参考文献
1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).
3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
◆产品信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
| 194-18561 | SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4组织透明化试剂 |
组织透明化用 | 250 mL |
◆相关产品
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
| 193-18455 | SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2 |
组织透明化用 | 500 mL |
| 196-18521 | SCALEVIEW-S0 SCALEVIEW® 组织透明化试剂S0 |
组织透明化用 | 250 mL |
| 041-34425 | deScale Solution 透明化洗涤溶液 |
组织透明化用 | 500 mL |
| 294-35631 | See Through Chamber, 0.3mm thick 透明室，0.3mm厚 |
组织透明化用 | 10 set |
| 291-35641 | See Through Chamber, 0.5mm thick 透明室，0.5mm厚 |
组织透明化用 | 10 set |
| 295-35661 | See Through Chamber, 1.0mm thick 透明室，1.0mm厚 |
组织透明化用 | 10 set |
| 292-35671 | See Through Chamber, 2.0mm thick 透明室，2.0mm厚 |
组织透明化用 | 10 set |
| 299-35681 | See Through Chamber, 3.0mm thick 透明室，3.0mm厚 |
组织透明化用 | 10 set |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
组织透明化试剂Q&A ver1.0
Tissue clearing reagent Q&A ver1.0
Q：组织透明化的原则
Ａ：组织透明化通常是按下面的步骤进行的：
Ａ：（a）固定 （b）透化 （c）脱色 （d）折射率匹配
Q：组织透明化的优势
Ａ：目前大多数可用的透明化技术，都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记，从而可视化组织中特定的蛋白。组织透明化成为
Ａ：了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。
Q：透明化技术的比较
Ａ：下面是水性的透明化技术。
Ａ：SeeDB（基于果糖的方法）在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂，所以对于透明化DiI（细胞膜红色荧光探针，一种神经示踪剂）
Ａ：标记的样品和使用光电关联显微镜（CLEM）的情况下，SeeDB有着一定优势。另外SeeDB会产生自体荧光，有时候会对辨认未标记的神经元
Ａ：结构（如神经毡）起着一定帮助。
Ａ：SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术，因此，当处理较大的组织时，CLARITY或者CUBIC会是更好的选择。
Q：切片厚度的最大值和最小值？
Ａ：您应该根据您的物镜的WD（工作距离）来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄且脆弱的样品，我们建议使用琼
Ａ：脂糖包埋。
Ａ：使用CUBIC，可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。
Q：试剂盒成分
Ａ：具体如下：
Ａ：1. SCALEVIEW-S试剂盒（299-79001）适用于20份 1-2 mm 的切片样品
Ａ：Ａ：1） SCALEVIEW-S0——100 mL
Ａ：Ａ：2） SCALEVIEW-S1——100 mL
Ａ：Ａ：3） SCALEVIEW-S2——100 mL
Ａ：Ａ：4） SCALEVIEW-S3——100 mL
Ａ：Ａ：5） SCALEVIEW-S4——100 mL
Ａ：Ａ：6） SCALEVIEW-SMT——100 mL
Ａ：2. SCALEVIEW-S试剂盒（290-80801）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SCaleCUBIC-1 Solution——250 mL
Ａ：Ａ：2） SCaleCUBIC-2 Solution——250 mL
Ａ：Ａ：3） Mounting Solution 1——40 mL
Ａ：Ａ：4） Mounting Solution 2——40 mL
Ａ：3. SeeDB试剂盒（299-79901）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SeeDB：20w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：2） SeeDB：40w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB：60w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：4） SeeDB：80w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：5） SeeDB：100w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：6） SeeDB——50 mL
Ａ：4. SeeDB2试剂盒（294-80701）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。
Ａ：Ａ：1） Saponin（皂角苷）——5g
Ａ：Ａ：2） SeeDB2G solution——50mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB2S solution——50mL
Ａ：Ａ：4） PBS——50mL
Q：样品的保存
Ａ：SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2~3周。您可以在2~3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的荧光信号。
Ａ：CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。
Ａ：SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年，而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观察SeeDB透明化的样品中的荧光
Ａ：信号。
Q：抗体的荧光标记
Ａ：应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。
Q：适用于SCALEVIEW-S的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Q：适用于CUBIC的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Zeiss Lightsheet Z.1（Carl Zeiss）
Q：适用于SeeDB2的显微镜
Ａ：Confocal（最好使用高NA的油浸镜头）
Ａ：STED（Leica Microsystems）
Ａ：SR-SIM（Carl Zeiss）
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Airyscan（Carl Zeiss）
Ａ：HyVolution（Leica Microsystems）
Ａ：Two-photon（最好使用复合浸没镜头）
Ａ：Confocal（最好使用高NA的甘油浸镜头）
Ａ：Light-sheet DLS（Leica，最好使用定制镜面的设备）
Q：重构
Ａ：对于定量用途，我们建议使用Neurolucida系统（MBF）。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表现。重构时也可以使用开源软件。
Ａ：例如，Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。
Q：物镜推荐
Q：其他物种？其他器官？
Ａ：对于昆虫样品和鱼类样品，建议选择CUBIC。
Ａ：昆虫相关文献：Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
Ａ：鱼类相关文献：Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).
对于多细胞球状体，选择SCALEVIEW-S会更好。
https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0
参考文献
1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).
3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
