一步法和两步法实验流程的比较
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产品名称
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ScreenFect ™ A plus
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Ａ厂家新产品 （+试剂）
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Ａ厂家产品
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推荐的实验流程
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一步法
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两步法
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实验用时
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２天
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３天
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所需DNA量
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低
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高
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细胞数目调整
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灵活
（细胞准备仅在转染之前）
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不灵活
（取决于细胞预培养条件）
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胰酶消化
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需要
（仅在转染之前）
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需要
（在细胞预培养之前）
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适于高通量筛选
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+++++
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+
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培养基的更换
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取决于细胞系
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一步法比两步法节省24小时！
ScreenA+.pdf
高性价比的高性能基因导入试剂
ScreenFect ™ 通信
基因导入人 iPS 细胞实验数据
介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例，供您参考。
◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例
在这里，我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol
<转染试剂的配制>
将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。
2. 用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。
3. 稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室温下孵育１小时以上。
<细胞悬液的配制>
1. 将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。
2. 将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。
3. 使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。
4. 将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。
5. 去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。
*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培养箱中静置５分钟。
8. 用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。
9. 转移至 15 mL离心管中。
10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。
11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。
12. 计算活细胞的数量。
13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×105 cells/mL。
<转染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。
※要点
接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。
◆实验数据
通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。
<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>
细胞数：5×105 cells/well
质粒 DNA 量：4 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
<mTeSR1 培养基的使用>
细胞数：5 x 105 cells/well
质粒 DNA 量：1 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。
● 建议基因导入时的细胞数约为 5×105 cells/well。
● 当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。
◆产品列表
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产品编号
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产品名称
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规格
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包装
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293-77101
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ScreenFect ™ A plus
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基因研究用
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0.2 mL
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299-77103
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1 mL
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297-77104
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1 mL×5
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