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- Q&A
- 参考文献
cellnest人Ⅰ型重组胶原蛋白肽
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
细胞培养用胶原蛋白
Cellmatrix® Series
Cellmatrix是作为细胞培养胶原蛋白开发的。可简单再现各种需要使用胶原蛋白的培养方法。 |
◆Cellmatrix® 系列选择指南(Nitta Gelatin提供)
◆优势、特色
Cellmatrix® Type I-A ● 猪腱由来,酸可溶性的Type-I胶原蛋白 ● 浓度3.0 mg/mL、pH3的无菌溶液 ● 高凝胶强度,适合胶原蛋白・凝胶包埋培养 ● 凝胶的透明度高,容易显微镜观察 |
凝胶透明度的比较 Type I –A是面对3D培养的产品,对凝胶形成速度 以及透明度进行了优化。可以在细胞下沉到培养容 器底部前,迅速地形成凝胶。且凝胶的透明度非常 高,易于观察细胞。 |
Cellmatrix® Type I-C
● 猪皮由来的胃蛋白酶可溶化的Type-I胶原蛋白 ● 浓度3.0 mg/mL、 pH3的无菌溶液 ● 低粘度,适合包被 ● 几乎不会凝胶化 |
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Cellmatrix® Type I-P
● 猪腱由来的胃蛋白酶可溶化的Type-I胶原蛋白 ● 浓度3.0 mg/mL、pH3的无菌溶液 ● 粘性低、容易处理 ● 形成凝胶 |
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Cellmatrix® Type Ⅳ
● 用胃蛋白酶处理牛晶状体前囊精制的Type-Ⅳ胶原蛋白 ● 低粘度、适合包被 ● 浓度3.0 mg/mL、pH3的无菌溶液 ● 不会凝胶化 |
◆胶原蛋白凝胶培养方法
事前准备
胶原蛋白凝胶上培养
点击此处查看视频版实验操作
胶原蛋白凝胶包埋培养
点击此处查看视频版实验操作
胶原蛋白涂层法
点击此处查看视频版实验操作
◆应用
【Type I-A】
经胶原蛋白、凝胶包埋培养的 小鼠乳腺癌细胞增殖形态。 |
Cellmatrix Type I-A具有高凝胶强度 |
【Type I-P】
Cellmatrix Type I-P可形成比较软的凝胶
【Type I-C】
培养细胞的伸展活性
左:未涂布 右:涂布胶原蛋白
彩页下载,请点击:Cellmatrix® 系列 细胞培养级胶原蛋白
【相关资料】
Cellmatrix® 胶原蛋白用细胞培养指南 |
Nitta-Gelatin Product Guide |
胶原蛋白凝胶培养方法
事前准备
胶原蛋白凝胶上培养
胶原蛋白凝胶包埋培养
胶原蛋白涂层法
Q: 请告知胶原蛋白和明胶的差异。为什么明胶在4℃做凝胶,胶原蛋白在37℃做凝胶?
A: 明胶是胶原蛋白的变性产物,具体地说,胶原蛋白是三股螺旋缠绕的结构,分子量为30万道尔顿,经热等因素而被破坏,形成无规则线圈
结构的蛋白质为明胶。所以明胶和胶原蛋白,一级结构(氨基酸组成)相同,二级结构不同。这个差异反映了胶原蛋白和明胶产生凝胶的
条件差异。
胶原蛋白保持三股螺旋缠绕的结构,在螺旋结构外侧排列着疏水性氨基酸——脯氨酸。胶原蛋白凝胶利用这个疏水性氨基酸,通过<温度
高的一方,具有高结合力>疏水结合,制备明胶。而明胶二级结构被破坏,亲水性氨基酸在外侧排列,通过氢结合和离子结合制作凝胶。
当温度高时,<氢结合力+离子结合力>克服明胶主链的热运动,不形成凝胶。但是,当变为低温时,<氢结合力+离子结合力>成为热运动
力量,明胶形成凝胶。
Q: 用明胶凝胶是否能培养?
A: 用明胶凝胶不能培养。明胶凝胶在37℃的培养条件下不会形成凝胶,将会溶化。
在组织培养液中,明胶的用途一般为:在培养皿中进行明胶涂层培养,或在明胶海绵上用福尔马林等进行桥联培养。
Q: 想购买胶原蛋白凝胶,是否有?
A: 以胶原蛋白溶液的状态作为商品销售。可根据附送的手册,进行胶原蛋白凝胶制作。
请将Cellmatrix Type I-A作为胶原蛋白凝胶培养产品,进行订购。为第一次做胶原蛋白凝胶培养法的顾客,准备了制作凝胶所必须的试剂
套装和胶原蛋白凝胶培养试剂盒。
Q: 为什么溶解于酸性溶液的胶原蛋白能进行培养?
A: 实际上,在胶原蛋白包埋细胞前,需要将酸性的胶原蛋白溶液调整成中性。
调整后的胶原蛋白因为低温保持者溶液状态,以这个状态将细胞悬液混合到胶原蛋白溶液中。
之后,将含有这个细胞的胶原蛋白溶液移到培养皿中,在37℃中加热,胶原蛋白以细胞包埋状态形成凝胶。
这个就是胶原蛋白凝胶包埋培养法的制作方法。
详细请参考在线手册。
Q: Cellmatrix有很多的胶原蛋白种类,应该选哪个才好?
A: 根据目的不同,变化使用的种类。
根据主要目的,将产品系列分成如下种类,请参考。
胶原蛋白凝胶培养试剂盒、Cellmatrix Typr I-A、Cellmatrix TypeI-P适合胶原蛋白凝胶培养法。
其他的Cellmatrix(Cellmatrix Type I-C,III,IV)不能进行胶原蛋白凝胶培养。
Cellmatrix Type I-C适合标准的涂层培养法——胶原蛋白涂层培养法。请根据客人实验的细胞及方法,考虑适合的Cellmatrix ,实验性地
考虑其他类型的胶原蛋白。例如,软骨细胞使用Cellmatrix Type II等,表皮细胞使用Cellmatrix Type IV等。
Q: 为何胶原蛋白凝胶比琼脂凝胶的培养效率好?
A: 请让我简单地说明琼脂培养法和胶原蛋白凝胶培养法的差异。
被包埋在胶原蛋白凝胶内的细胞,在胶原蛋白基质上以贴壁的状态进行增殖。 .
可是,被琼脂包埋的细胞,在琼脂基质上以未贴壁状态进行增殖。所以,贴壁依赖性细胞在胶原蛋白凝胶中进行细胞增殖,在琼脂内不进行
细胞增殖。
有报告指出:贴壁依赖性比较低的癌细胞,采用胶原蛋白凝胶培养法比采用琼脂培养法,显示高倍数的克隆形成率。
有众多报告指出:胶原蛋白凝胶法对细胞增殖、细胞分化的诱导、形态形成等有效。
关于胶原蛋白凝胶培养法的详细报告,请参考主页的论文介绍。
Q: 胶原蛋白凝胶包埋培养法和胶原蛋白、涂层培养法,有什么不同?
A: 胶原蛋白凝胶包埋培养法是在胶原蛋白凝胶内做细胞包埋,进行细胞培养的方法。
被包埋到胶原蛋白内的细胞,和体内一样进行三维增殖。
胶原蛋白涂层培养法是在培养皿上做胶原蛋白薄涂层,然后再上面进行细胞培养的方法,细胞呈单层增殖。
综上所述,胶原蛋白凝胶包埋培养法是作为细胞外基质,利用胶原蛋白的三维培养法:胶原蛋白涂层培养法是利用胶原蛋白作为细胞吸附因
子的二维培养法(单层培养法)。
Q: 想进行胶原蛋白凝胶培养,应该选哪种Cellmatrix才好?
A: 请选Cellmatrix Type I-A。还有为初学者准备的,含有制作胶原蛋白凝胶全部试剂的胶原蛋白凝胶培养试剂盒。
建议第一次使用的人购买这个胶原蛋白凝胶培养试剂盒,试剂盒货号是638-00781。
Q: 想进行胶原蛋白、涂层培养防法,应该选哪种Cellmatrix才好?
A: 请选Cellmatrix Type I-C。Cellmatrix Type I-C具有低粘度,处理容易,适合标准胶原蛋白涂层培养法。
根据细胞种类和培养条件的不同,也能得到更好的适合细胞的胶原蛋白涂层。
例如,表面细胞可使用Cellmatrix Type IV胶原蛋白等。请进行实验研讨。
Q: 想学习胶原蛋白培养法,请介绍合适的论文。
A: 详细请参考在线手册。
该手册详细地介绍了:所谓的胶原蛋白是什么、胶原蛋白培养法的效果、胶原蛋白培养发的具体方法等。
关于论文,请参考主页的论文介绍项目。
Q: 请具体地告知胶原蛋白、凝胶包埋培养方法。
A: 将作为酸性溶液的胶原蛋白溶液Cellmatrix Type I-A调整成中性。
调整后的胶原蛋白因为低温,保持着溶液状态,以这个状态将细胞悬浊液混合到胶原蛋白溶液中。之后江汉油田这个细胞的胶原蛋白溶液
移到培养皿中,在37℃中加热,胶原蛋白以细胞包埋状态形成凝胶。
关于详细 ,请参考在线手册。
Q: 请具体地告知胶原蛋白涂层的方法。
A: 将Cellmatrix Type I-C用稀盐酸(pH 3.0,约10-3 M)稀释10倍以上,放入培养皿中,在室温中静置30~60分钟。
静置后,摄取胶原蛋白溶液,以常温、无菌状态干燥培养皿。干燥后,用PBS或培养液洗涤2次,加入细胞悬液,进行普通培养。
Q: 进行胶原蛋白涂层时,向培养皿注入多少量的胶原蛋白溶液才好?
A: 胶原蛋白溶液注入量为均匀覆盖培养皿底面即可。
以1 mL/10 cm2比例为标准
Q: Cellmatrix Type IV是否能进行包埋培养?
A: 单独使用Cellmatrix Type IV胶原蛋白不能进行包埋培养。众多胶原蛋白中只有I型胶原蛋白具有凝胶化能力。
若想研究在包埋培养下的IV型胶原蛋白与细胞的互相作用,请混合I型胶原蛋白IV型胶原蛋白。Cellmatrix Type I和Cellmatrix Type IV的混
合比例,在1:2~2:1范围为好。混合比例与胶原蛋白凝胶强度的关系,请参考本公司手册<使用胶原蛋白的细胞培养法>。
Q: 所谓的胶原蛋白是不是培养基?
A: 胶原蛋白不是培养基。所谓的胶原蛋白是培养基的基质。
胶原蛋白凝胶是在培养基中作为整体结构支撑体的胶原蛋白组织,相当于生物体中的血液。
在体外的细胞作为胶原蛋白的细胞外基质存在。
将胶原蛋白作为培养基质使用的胶原蛋白凝胶包埋培养,旨在重现生物内环境的状态。
Q: 请告知胶原蛋白的稀释方法。
A: 用pH 3.0稀盐酸稀释。因为胶原蛋白具有高粘性,使用像试管一样的细小容器比较难稀释,使用三角烧瓶或离心管(例如:50 mL培养用
塑料离心管等)等粗的容器比较容易稀释。
三角烧瓶,像画圆一样摇晃10次左右:离心管,来回颠倒10次左右,进行搅拌稀释。如果,出现起泡,可静置一晚后使用,或以低速离心
分离(1500 rpm,3 min)脱气后使用。同时,开发了胶原蛋白、涂层培养用低粘度型的Cellmatrix Type I-C。可一起讨论。
Q: pH3.0盐酸是多少摩尔值?请告知制作方法。
A: pH盐酸是10-3摩尔/升。因为盐酸是强酸,浓度基本合适,调整好pH计,就可快速、正确地制作。
例如,一边用pH仪表测量,一边用巴斯德移液管一滴一滴向100 mL蒸馏水中加入1N的盐酸。
pH3.0盐酸制成后,请以高压灭菌或过滤灭菌。
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
cellnest人Ⅰ型重组胶原蛋白肽
培养基材料
可用作细胞培养的基础材料的人I型重组胶原蛋白肽,现已开售。本品不含动物源物质(无异物),可实现与动物性胶原相同或以上的细胞贴壁性。
用于再生医疗研究领域。
◆特点
● 不含动物由来物质(无异物)・・・通过酵母生产,实现高安全性
● 与动物胶原具有同等或以上的细胞贴壁性 ・・・具有细胞贴壁性同样的RDG序列的复合构造
● 活体分解吸收性・・・在活体内易分解吸收,适用于医疗研究材料
● 分子量均一・・・可加工成各种形态
● 低内毒素(10 EU/g以下)
结构
从人I型重组胶原蛋白肽α1链中将含有高细胞贴壁性的RGD序列部分切出4种类型片段,片段连接后,3个相同片段连接成结合物形成本产品 。由于本品不含抗原部分,所以保持很高的细胞贴壁性。
易加工型
本品的分子量51 kDa,分子量均一,操作简单。
可加工为海绵、颗粒、多孔质粒子等形态。
产品质量稳定
本品是通过酵母生产的重组体,批次间品质差异小,可稳定供给。
◆使用案例
培养实例细胞
内皮细胞(HUVEC),角质化细胞(NHEK),成肌细胞(C2C12),嗜铬细胞瘤(PC12),成骨细胞系(MC3T3-L1),成纤维细胞系(MC3T3-E1),上皮细胞系(CHO-K1, Vero, MDCK),肾细胞(CV-1)
在涂层了本品的培养皿上培养的HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞),贴壁和伸展形态良好。
注:本产品已停产,需要其他细胞外基质可点击:
颗粒型细胞支架cellnest μ-piece
凝胶包埋及薄层包被用胶原Cellmatrix
3D培养全合成温敏性水凝胶Mebil Gel
各种细胞系的细胞涂层方法
1. 3T3L1 |
2. BHK-21 |
3. C2C12 |
4. CHO-K1 |
5. CV-1 |
6. hMSC |
7. HUVEC |
8. MC3T3E1 |
9. MDCK |
10. NHEK |
11. Vero |
欲了解各种细胞系的细胞涂层方法,请点击相关文字。
参考文献
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[2]Kentaro Nakamura, Reiko Iwazawa & Yasuhiro Yoshioka.Introduction to a new cell transplantation platform via recombinant peptide petaloid pieces and its application toislet transplantation with mesenchymal stem cells.Transplant International, Volume 29, Issue 9, September 2016, Pages 1039-1050
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
635-30081 | cellnest人Ⅰ型重组胶原蛋白肽 0.1%溶液 cellnest, recombinant peptide based on human collagen type I 0.1% solution |
20 mL | - |
638-30071 | cellnest人Ⅰ型重组胶原蛋白肽冷冻干燥体 cellnest, recombinant peptide based on human collagen type I Lyophilized |
100 mg | - |
由人I型胶原蛋白重组多肽形成的新型细胞支架
Cellnest μ-piece
Cellnest μ-piece是由人I型胶原蛋白重组多肽经过交联处理所形成的、具有特殊结构的细胞支架。
使用时仅需与细胞混合,就可装配成可防止细胞团中心发生坏死的三维细胞结构体(CellSaic),可应用于细胞移植实验。
◆特点
何谓Cellnest
Cellnest是一种以不含有任何动物源成分的酶所产生的重组多肽,由FUJIFILM开发。
其序列不含人I型胶原抗原部位,因此容易被生物体吸收分解。
细胞与独特花瓣形结构的微片混合培养,可形成三维细胞结构体
高细胞存活率
■ in vitro LIVE/DEAD染色
LIVE:Calcein(绿) DEAD:EthD-1(红)
在hMSC制作的多细胞球状体中可观察到散布的死细胞;用μ-piece制作的CellSaic中,可观察到很多活细胞。
■ in vitro ATP assay (Day 7)
在hMSC(2×104 cells)中进行ATP定量。从图示中可看到与Spheroid的存活率相比,CellSaic的存活率高约2倍。
细胞存活率高,可应用于细胞移植。微片易于被生物体分解、吸收,是安全型的材料(胶原蛋白重组多肽)
大鼠模型由于大脑动脉阻塞引起右脑梗塞,在其梗塞的部位局部移植入CellSaic(BMSC+μ-piece)。将计算左转行动次数并进行评价,作为症状改善的简单指标。
与仅投与细胞悬液相比,可确认移植进CellSaic对左转行动有改善效果。
◆Cellnest μ-piece制作的CellSaic是什么
● 在细胞球状体中紧密嵌入细胞支架,抑制细胞死亡
● 移植后易于血管导入
细胞球状体
400 μm以上厚度的细胞团,从中心位置开始细胞出现死亡(中心坏死)
CellSaic
以细胞支架与细胞间的间隙,或者是细胞支架自身作为氧气、营养、废弃物的通道
CellSaic制作步骤概要
将μ-piecec(0.1 mg/mL)和细胞(1.0×105 cells/mL)的悬液按照200 μL/well加入96孔U型吸附处理板进行培养。用板式离心机进行离心(600 g×5 min),CO2 孵育(37℃)1~2日,即可完成。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
633-44791 | cellnest μ-piece | 10 mg |
※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |