标签归档：糖基化

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

发表于由
  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

粘蛋白检测试剂盒粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

Mucin Assay Kit

——健康和美容研究试剂

 


◆背景


粘蛋白属于高度糖基化蛋白质家族，是粘膜的主要成分，例如唾液，泪液，胃液，肠液。粘蛋白的 基本构型是枝状糖链连接到多肽的大分子。糖链的非均质特性使其具有多样性，分子具有各种功能，如特异性分子识别。
　　一些糖链识别病毒和细菌的特定蛋白质。粘蛋白锚定在肠中粘膜屏障功能中，阻止病原体和毒素通过肠壁进入血管中。该试剂盒可用于检测粪便中的粘蛋白含量。
　　粘蛋白属于高分子（1000 kda-10000 kda）高度糖基化蛋白的家族。蛋白质核内的粘蛋白结构域富含苏氨酸、丝氨酸和羟脯氨酸，糖链的还原末端（GalNAc）通过翻译后Ｏ-糖基化与这些氨基酸频繁连接。该试剂盒具有确定粪便粘蛋白含量组分的功能。

　　粪便粘蛋白测定可用作肠屏障功能的指标。该试剂盒利用荧光检测来测定粘蛋白的含量。

　　我们提供的该试剂盒可以供研究功能性食物和感染的客户使用。

 粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

步骤１：从粪便中提取和部分纯化粘蛋白。

步骤２：粘蛋白Ｏ-糖苷连接的寡糖链的测定通过稀碱进行β-消除，形成糖链的还原端。还原碳水化合物在高温下进行荧光标记以产生荧光缩合

            物。


粘蛋白的结构

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

 粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

 ◆试剂盒组分


组件

规格

数量

储存条件

缓冲溶液Ａ

100 mL

3

4-10℃

缓冲溶液Ｂ

25 mL

1

缓冲溶液Ｃ

25 mL

1

试剂Ａ

1.0 mL

1

试剂Ｂ

1.5 mL

2

标准溶液

（GalNA，250 μg/mL）

1.0 mL

1

酶溶液

1.5 mL

1

◆优点・特色


●  粘蛋白和 IgA 能阻止细菌和毒素的入侵

●  作为肠屏障的一部分，粘蛋白和 IgA 能防止病原菌和毒素通过肠壁转移到血管内。


测定理论
　　通过对粪便中的 β-葡萄糖苷酶热变性防止粪便粘蛋白降解
　　↓
　　粗提取粘蛋白
　　↓
　　用酶溶液分解淀粉
　　↓
　　用乙醇沉淀纯化粘蛋白
　　↓
　　将试剂Ａ加入纯化的粘蛋白中，并在碱性条件下进行热处理。 （试剂Ａ将与粘蛋白的糖还原末端反应，并在碱处理后发出荧光）
　　↓
　　加入缓冲液Ｃ并测定荧光强度（激发336nm，荧光383nm）

　　（具体操作请看相关资料）

◆案例・应用


喂食高脂肪食物的大鼠肠屏障部分注射多酚的效果

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

图1 粘蛋白定量标准曲线

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

图2 粪便中的粘蛋白含量

应用

　　用于测定粪便中的粘蛋白含量。

 


相关资料

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

Mucin_Assay_Kit.

◆操作步骤


●　本产品是专为荧光酶标仪测量设计（96孔板）。
●　当使用荧光读板机时，可测量100个样品。
●　当使用分光光度计测量时，请使用微细胞。



缓冲液Ａ的制备
用100 mL蒸馏水溶解1块片剂。
粪便粉末的制备：粪便冻干并在研钵中研磨，储存在-20℃备用。

II.粪便粘蛋白的测定
　　1、称量100 mg粪便粉末放入微量试管（2 mL）中，加入1 mL缓冲液A，然后用涡流混合器混合30秒钟。


粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

　　

　　2、在95℃下加热试管10分钟使细菌的糖苷酶变性。


粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

　　

　　3、在37℃下加热90分钟，从粪便中提取粘蛋白。

　　4、在4℃下离心20,000×g 15分钟。
　　5、将200 μL上清液转移到另一个微量试管中，加入200 μL缓冲液B，用涡流混合器混合溶液。

　　6、加入10 μL酶溶液混合，在50℃下加热试管20分钟分解淀粉。
　　7、将离心管冷却至室温，加入125 μL的99.5％乙醇，混合后，在-20℃下静置过夜。


粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit


　　8、次日，在4℃下20,000×g离心10分钟，去上清。向沉淀加入1mL缓冲液A，重溶沉淀。（样品溶液）


粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit


　　9、将20 μL样品溶液和标准溶液转移到另一个微量试管（500 μL）中，加入24 μL试剂混合物（使用前以1:5混合试剂A和试剂B），混合后， 100℃下加热微量试管30分钟。

　　10、冷却至室温，加入200 μL缓冲液C，用涡流混合器混合。


粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit


　　11、将100 μL溶液转移到96孔黑色孔板中，并在波长（例如：336 nm em：383 nm）实用荧光读板机测量荧光强度。
　　12、通过如下所示的连续稀释创建标准曲线。 通过这些点绘制平滑曲线以构建标准曲线。 通过标准曲线读取样品的浓度。
　　13、计算1 g粪便中的粘蛋白含量。步骤（12）测得的值的50倍是1g粪中的粘蛋白含量。

Calibrator Number

Quantaity of Standard

Quantaity of Dilution Buffer 

Final Concentration

1

500 μL of Standard Solution

0

250 μg/mL

2

500 μL of Calibrator 1

500 μL

125 μg/mL

3

500 μL of Calibrator 2

500 μL

63 μg/mL

4

500 μL of Calibrator 3

500 μL

31.5 μg/mL

5

500 μL of Calibrator 4

500 μL

15.75 μg/mL

6

500 μL of Calibrator 5

500 μL

7.875 μg/mL

7

0

500 μL

0

工作校准品：N-乙酰葡萄糖胺250 μg/ mL
●　通过连续稀释创建标准曲线，如下图所示。
●　剩余的未稀释校准品应储存在2-10°C。
●　稀释校准品稳定，可在2-10°C保存1个月。

参考文献


［1］

Susumu Honda,Yoshikazu Matsuda, Masaye Takahashi, and Kazuaki KakehiFluorimetric Determination of Reducing Carbohydrates with2-Cyanoacetamide and Application to Automated Analysis of Carbohydrates as Borate Complexes.(1980) Analytical Chemistry, Vol.52, No. 7

［2］

Bovee-OudenhovenIM, Termont DS, Heidt PJ, et al.: Increasing the intestinal resistance of rats to the invasive pathogen Salmonella enteritidis: additive effects of dietary lactulose and calcium. Gut 40: 497-504, 1997.

［3］

Crowther RS, Wetmore RF: Fluorometric assay of O-linked glycoproteins by reaction with 2-cyanoacetamide. Anal Biochem 163: 170-174, 1987.

［4］

Okazaki Y, Han Y, Kayahara M, Watanabe T, Arishige H, Kato N. Consumption of curcumin elevates fecal immunoglobulin A, an index of intestinal immune function, in rats fed a high-fat diet. J NutrSciVitaminol (2010);56(1):68-71.

［5］

YukakoOkazaki,HiroyukiTomotake, Kazuhisa Tsujimoto, Masahiro Sasaki,andNorihisa Kato. Consumption of a Resistant Protein, Sericin, Elevates Fecal Immunoglobulin A, Mucins, and Cecal Organic Acids in Rats Fed a High-Fat Diet. (2011) The Journal of Nutrition, 21, 10.3945/jn.111.144246.

［6］

ZakiUtama,Yukako Okazaki, Hiroyuki Tomotake, Norihisa Kato, Tempe Consumption Modulates Fecal Secondary Bile Acids, Mucins, Immunoglobulin A, Enzyme Activities, and CecalMicroflora and Organic Acids in Rats. Foods Hum Nutr(2013) 68:177-183

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
CSR-FFA-Mu-K01E Mucin Assay Kit
粘蛋白检测试剂盒		 1盒

蛋白去糖基化混合液 II |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

如图 1 所示，糖基化是最常见的一种蛋白质翻译后修饰。当聚糖链附着在核心蛋白上的天冬酰胺残基上时，形成 N-连接糖基化。当聚糖链附着在丝氨酸或苏氨酸残基上时，形成 O-连接糖基化。可使用化学法或酶促法从糖蛋白中去除寡糖。但是，化学方法（例如使用弱碱或温和的肼解进行 β -消除）处理过于剧烈，并可能导致糖基去除不完全和蛋白质降解；酶促法则更温和，可以在不降解蛋白质的情况下实现糖基的完全去除。

PNGase F 是去除糖蛋白中几乎所有 N-连接寡糖的最有效的酶促法。PNGase F 可将天冬酰胺残基脱氨基为天冬氨酸，从而切出完整的寡糖，后者可用于进一步分析。某些植物和昆虫的寡糖中含有一个通过 α(1-3) 键与核心糖链相连的岩藻糖，这种结构可抵抗 PNGase F 的切割活性。

要去除 O-连接糖链，必须通过一系列糖苷外切酶去除单糖，直到附着在丝氨酸或苏氨酸上的核心仅剩 Galβ1-3GalNAc（核心 1）和/或 GlcNAcβ1-3GalNAc（核心 3）为止。NEB O-糖苷酶克隆自粪肠球菌（Enterococcus faecalis），可以去除这些没有修饰的丝氨酸或苏氨酸残基的核心结构。任何对核心结构的修饰，包括唾液酸化，都会阻断 O-糖苷酶的作用。唾液酸残基很容易被 α2-3,6,8,9 神经氨酸苷酶 A 去除。此外，可在去糖基化反应中加入 β(1-4) 半乳糖苷酶 S 和 β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f 等糖苷外切酶，以便去除存在于核心结构上的其它复杂修饰。这种酶结合可能无法去除所有 O-连接寡糖，但应能去除许多常见的寡糖结构。

蛋白去糖基化混合液 II 包含去除所有 N-连接、简单 O-连接糖链以及一些复杂 O-连接糖链所需的所有酶、试剂和对照品。该产品中的酶能用于 20 次反应或处理 2 mg 糖蛋白。蛋白去糖基化混合液 II 中包含的所有酶和试剂都与质谱兼容。在去糖基化处理后，样品可直接进行质谱分析。

图 1： 经 O-连接和 N-连接糖基化修饰的糖蛋白。

蛋白去糖基化混合液 II |

图 2

蛋白去糖基化混合液 II |
小牛胎球蛋白在酶作用下去糖基化，非变性条件使用 10X 去糖基化混合缓冲液 1，变性条件使用 10X 去糖基化混合缓冲液 2。20 µg 反应产物上样于 10-20% 的 Tris-甘氨酸 SDS-PAGE 胶上。
泳道 1：彩色预染蛋白 Standard，宽范围（11-245 kDa）（NEB #P7712）
泳道 2：20 μg 未处理的胎球蛋白对照
泳道 3：20 µg 胎球蛋白使用去糖基化混合缓冲液 1 在非变性条件下去糖基化
泳道 4：20 µg 胎球蛋白使用去糖基化混合缓冲液 2 在变性条件下去糖基化
泳道 5：5 µl 蛋白去糖基化混合液 II

蛋白去糖基化混合液 II：
PNGase F（无甘油），重组酶：
10,000 unit/管

O-糖苷酶：
80,000 unit/管

α2-3,6,8,9 神经氨酸苷酶 A：
400 unit/管

β1-4 半乳糖苷酶 S：
960 unit/管

β-N-乙酰氨基己糖苷酶f：
300 unit/管

底物对照：
胎球蛋白，0.5 mg（含有唾液酸化的 N-连接和 O-连接糖链）

蛋白去糖基化混合液 II 中包含以下酶
O-糖苷酶（NEB #P0733）又称 α-N-乙酰氨基半乳糖苷内切酶，是克隆自粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的重组酶（1）。该酶可以从糖蛋白中切除核心 1 和核心 3 型 O-连接二糖。分子量约 147 kDa。

PNGase F（无甘油），重组酶（NEB #P0709），也称为肽：N-糖苷酶 F，克隆自米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola，旧称 Flavobacterium meningosepticum），在 E. coli 中表达（2）。PNGase F（无甘油），重组酶是一种酰胺酶，可以在无 α(1-3) 岩藻糖基化的 N-连接糖蛋白的高甘露糖型、杂合型和复合型寡糖最内侧 GlcNAc 和天冬酰胺残基之间进行切割。分子量约 36 kDa。

α2-3,6,8,9 神经氨酸苷酶 A（NEB #P0722）又称唾液酸酶 A，是一种克隆自产脲节杆菌（Arthrobacter ureafaciens）的重组酶，在 E. coli 中表达（3）。该酶可催化水解糖蛋白和寡糖中 α2,3、α2,6、α2,8 和 α2,9 连接的 N-乙酰神经氨酸残基。分子量约 100 kDa。

β1-4 半乳糖苷酶 S（NEB #P0745）是一种克隆自肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的重组酶，在 E. coli 中表达（4）。该酶是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 β1-4 连接的半乳糖残基。分子量约 231 kDa。

β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f（NEB# P0721）是一种克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus）（5）的重组酶，在 E. coli 中过表达（6）。该酶可催化水解寡糖末端 β-N-乙酰氨基半乳糖和氨基葡糖残基。分子量约 100 kDa。

产品类别:
Exoglycosidases Products,
Endoglycosidases Products,
Proteome Analysis Products

应用:
Expression Systems,
Glycan Sequencing,
Protein Digestion,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P6044S     -20    
        Protein Deglycosylation Mix II P6044SVIAL -20 1 x 0.1 ml 20 reactions
        Deglycosylation Mix Buffer 1 B6044SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        Deglycosylation Mix Buffer 2 B6045SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        Fetuin P6042SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10 mg/ml

  • 特性和用法

    贮存溶液

    50 mM NaCl
    20 mM Tris-HCl
    2.6 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    蛋白去糖基化混合液 II 包含去除所有 N-连接、简单 O-连接糖链以及一些复杂 O-连接糖链所需的所有酶、试剂和对照品。该产品中的酶能用于 20 次反应或处理 2 mg 糖蛋白。蛋白去糖基化混合液 II 中包含的所有酶和试剂都与质谱兼容。

  • 相关产品

    相关产品

    • p0709-pngase-f-glycerol-free-recombinant
    • p0733-o-glycosidase
    • α2-3,6,8,9 神经氨酸苷酶 A
    • β1-4 半乳糖苷酶 S
    • β-N–乙酰氨基己糖苷酶 f
    • α1-2 岩藻糖苷酶
    • α1-3,4 岩藻糖苷酶
    • β1-3 半乳糖苷酶
    • α-N-乙酰半乳糖胺酶

  • 注意事项

    1. 蛋白去糖基化混合液 II 提供两种不同的反应缓冲液。请参考“操作说明、说明书 & 用法”菜单，了解与各个缓冲液系统相关的操作说明。当需要使用非变性条件时，请使用 10X 去糖基化混合缓冲液 1（NEB #B6044）。10X 去糖基化混合缓冲液 2（NEB #B6045）虽会还原糖蛋白，但能实现最高效且最完整的去糖基化水平。如果无需非变性条件，则推荐使用 10X 去糖基化混合缓冲液 2。
    2. 不建议将蛋白去糖基化混合液 II 用于粘蛋白样底物。

  • 参考文献

    1. Koutsioulis, D. Landry, D. and Guthrie, E.P. (2008). Glycobiology. 18, 799-805.
    2. Plummer, T.H. Jr. and Tarentino, A.L. (1991). Glycobiology. 1, 257-263.
    3. McLeod, E. New England Biolabs, Inc. Unpublished observation
    4. Chen, M. New England Biolabs, Inc. Unpublished observation
    5. Robbins, P. et al. (1992). Gene. 111, 69-76.
    6. Guan, C. and Wong, S. New England Biolabs, Inc. Unpublished observation

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Reaction Protocols for Protein Deglycosylation Mix II (P6044)

  • 应用实例

    • Analysis of a Fusion Protein using the Protein Deglycosylation Mix II and Mass Spectrometry

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Endoglycosidase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between the discontinued Protein Deglycosylation Mix (NEB# P6039) and the new Protein Deglycosylation Mix II (NEB# P6044)?
    2. Two different reaction buffers (10X Deglycosylation Mix Buffer 1 and 2) are supplied with the Protein Deglycosylation Mix II. How do I know which buffer to use?
    3. Are downstream analysis such as HPLC and Mass Spectrometry compatible with the Protein Deglycosylation Mix II?
    4. I tried the Protein Deglycosylation Mix II on my glycoprotein and didn’t see removal of the carbohydrate. What could be the problem?
    5. How much Protein Deglycosylation Mix II should I use to remove the carbohydrates under native (non-denaturing) conditions?
    6. What is a good control substrate for the Protein Deglycosylation Mix II?
    7. Are Protease Inhibitors acceptable for use with the Protein Deglycosylation Mix II reaction?

尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（也称：尿嘧啶-DNA 糖基化酶） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

E. coli 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）催化从含尿嘧啶的 DNA 上释放尿嘧啶。UDG 能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，但不能从 6 碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自大肠杆菌的 UDG 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0280S     -20    
        Uracil-DNA Glycosylase (UDG) M0280SVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0280L     -20    
        Uracil-DNA Glycosylase (UDG) M0280LVIAL -20 1 x 1 ml 5,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指每分钟从含尿嘧啶双链 DNA 上催化释放 60 pmol 尿嘧啶所需要的酶量。通过检测 37℃ 条件下，30 分钟从 50 µl 含 0.2 µg DNA（104-105 cpm/µg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。

    反应条件

    1X UDG 反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X UDG 反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    1 mM EDTA
    (pH 8 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.1 mg/ml Recombinant Albumin
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    50 µl 总反应体系，含 1X UDG 反应缓冲液、1 单位尿嘧啶 DNA 糖基酶、0.2 µg 3H-尿嘧啶 DNA（104 -°105cpm/μg），37℃ 温育 30 分钟。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 在 37℃ 条件下，1 单位 UDG 与 0.1 µg 含尿嘧啶的 DNA 温育 10 分钟后，此 DNA 不能再被 DNA 聚合酶复制。95℃ 加热 10 分钟可使该酶 95% 的活性丧失。由于 95℃ 热处理后该酶仍有部分活性，建议加入尿嘧啶糖基酶抑制剂来阻止产物 DNA 的降解，也可以立即用酚/氯仿抽提反应产物。

  • 相关产品

    相关产品

    • 尿嘧啶糖基酶抑制剂（UGI）（也称：尿嘧啶糖基化酶抑制剂）

    单独销售的组分

    • UDG Reaction Buffer

  • 注意事项

    1. UDG 在较广的 pH 值范围内均有活性，最适 pH 为 8.0，不需要二价阳离子。活性受高离子强度（> 200 mM）所抑制。

  • 参考文献

    1. Lindahl, T. et al. (1977). J. Biol. Chem.. 252, 3286-3294.
    2. Wang, Z. et al. (1991). Gene. 99, 31-37.
    3. Devchand, P.R. et al. (1993). Nucl. Acids Res.. 21, 3437-3443.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of UDG in the NEBuffers 1-4?
    2. Will UDG work in T4 DNA ligase buffer?
    3. What is the molecular weight of UDG?
    4. Is UDG a tagged protein?
    5. I see that UDG works optimally at 37°C. Do you have another glycosylase that works at higher temperatures?
    6. Does the Uracil Glycosylase inhibitor (UGI) inhibit UDG?
    7. Does UDG cut RNA?
    8. Can UDG be used to remove dU from a short 21mer oligo? Do the dU residues need to be spaced in any special way to avoid problems with cleavage?
    9. Are there any specific recommendations for the use of UDG on single stranded DNA? The materials on the web and data card seem to describe conditions for use with dsDNA.
    10. What is the difference between UDG and UNG?
    11. Does UDG release uracil from ss and dsDNA?

尿嘧啶糖基酶抑制剂（UGI）（也称：尿嘧啶糖基化酶抑制剂） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

尿嘧啶糖基酶抑制剂（UGI），来源于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）噬菌体 PBS1，蛋白分子量较小（9.5 kDa），可抑制 E. coli 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）以及来源于其它物种的 UDG。UGD 与 UGI 按 1:1 比例进行可逆的蛋白结合，发挥对 UDG 的抑制作用。UGI 可解离 UDG-DNA 复合物。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）噬菌体 PBS1 的 UGI 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0281S     -20    
        Uracil Glycosylase Inhibitor (UGI) M0281SVIAL -20 1 x 0.1 ml 2,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0281L     -20    
        Uracil Glycosylase Inhibitor (UGI) M0281LVIAL -20 1 x 0.5 ml 2,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位 UGI 指在 50 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时抑制 1 单位大肠杆菌 UDG 所需的酶量。1 单位 UDG 指每分钟从含尿嘧啶的双链 DNA 上催化释放 60 pmol 尿嘧啶所需的酶量。

    反应条件

    1X UDG 反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X UDG 反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    1 mM EDTA
    (pH 8 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    70°C for 10 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    • 尿嘧啶糖基酶抑制剂（UGI）可抑制尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）。由于 95℃ 热处理后该酶仍有部分活性，UGI 可用于阻止产物 DNA 的后续降解。

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • UDG Reaction Buffer

  • 注意事项

    1. 由于 95℃ 热处理后该酶仍有部分活性，UGI 可用于阻止产物 DNA 的后续降解。
    2. 对 NEB 的大肠杆菌 UDG 酶有效（NEB #M0280）。
    3. 在原始反应中加入与 UDG 等量或过量的 UGI。
    4. 在 NEBuffer 1-4 中都有活性。（NEB #B7001、NEB #B7002、NEB #B7003、NEB #B7004）
    5. UGI 的热稳定性极高，煮沸 10 分钟仍具有 95% 以上的活性。

  • 参考文献

    1. Lindahl, T. et al. (1977). J. Biol.Chem.. 252, 3286-3294.
    2. Wang, Z., et al. (1991). Gene. 99, 31-37.
    3. Bennett, S. E. and Mosbaugh, D. W. (1992). J. Biol. Chem.. 267, 22512-22521.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • DNA Damage and PreCR

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the nature of the Uracil Glycosylase Inhibitor?
    2. How does UGI inhibit UDG?
    3. Does UGI inhibit the activity of all UDGs?
    4. What is the molecular weight of UGI?
    5. Why is it necessary to use UGI in a reaction?