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T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

产品类别:
Kinases Products,
Buffers Products

应用:
Phosphorylation (Kinase)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • B0201S     -20    
        T4 Polynucleotide Kinase Reaction Buffer B0201SVIAL -20 4 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    1X 缓冲液组分

    70 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    5 mM DTT
    pH 7.6@25°C

  • 相关产品

    相关产品

    • T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

工具 & 资源

  • 选择指南

    • NEB Diluent and Buffer Table

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is supplied with the T4 Polynucleotide Kinase Reaction Buffer pack?
    2. What is the composition of the T4 Polynucleotide Reaction Buffer?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions

Hexokinase 己糖激酶

发表于由

Hexokinase

己糖激酶

品牌：Asahikasei
CAS No.：9001-51-8
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

635-22651

 – 20000 U – 咨询 – –


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* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´-羟基末端以及 3´-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´-磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´-单磷酸核苷和脱氧 3´-二磷酸核苷上水解掉（1）。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）基因。酶纯化参考改进 Richardson 方法进行（1）。

产品类别:
DNA Labeling Products,
Kinases Products

应用:
Phosphorylation (Kinase)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0201V     -20    
        T4 Polynucleotide Kinase M0201VVIAL -20 1 x 0.025 ml 10,000 units/ml
        T4 Polynucleotide Kinase Reaction Buffer B0201SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0201S     -20    
        T4 Polynucleotide Kinase M0201SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10,000 units/ml
        T4 Polynucleotide Kinase Reaction Buffer B0201SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0201L     -20    
        T4 Polynucleotide Kinase M0201LVIAL -20 1 x 0.25 ml 10,000 units/ml
        T4 Polynucleotide Kinase Reaction Buffer B0201SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位即 1 Richardson 单位，指在 50 μl 总反应体系，含有 66 µM [γ-32P] ATP（5 x 106 cpm/µmol）和 0.26 mM 5´ 羟基末端鲑鱼精子 DNA 的 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中，37℃ 条件下，30 分钟内催化 1 nmol [32P] 掺入酸不溶物所需的酶量（1）。

    反应条件

    1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
    70 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    5 mM DTT
    (pH 7.6 @ 25°C)

    使用浓度

    10,000 units/ml

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.1 µM ATP
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    • DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序（2）
    • 在寡核苷酸上添加 5´ 磷酸，以便进行后续连接
    • 除去 3´ 磷酸基团（3）

  • 相关产品

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    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液

  • 注意事项

    1. 提高 ATP 的浓度可让缺口磷酸化。切刻位点不能有效地磷酸化。CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可以替代 ATP 作为磷酸供体（1）。
    2. 利用交换反应可以避免末端标记前的去磷酸化，尽管这会导致较低的标记比活性。
    3. 在反应体系中添加终浓度为 100 µM ADP 便仍可保持足够的掺入水平。要达到更高的掺入水平，请使用参考文献（2）中所描述的缓冲液。

  • 参考文献

    1. Richardson, CC. (1981). The Enzyme. 14, 299-314.
    2. Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual.. 10.59-10.67,11.31-11.33.
    3. Cameron, V. and Uhlenbeck, O.C. (1977). Biochemistry. 16, 5120-5126.
    4. Berkner, K.L. and Folk, W.R. (1977). J. Biol. Chem.,. 252, 3176-3184.
    5. Soltis, D.A. and Uhlenbeck, 0.C. (1982). J. Biol. Chem.. 257, 11332-11339.
    6. Wang, L.K. and Human, S. (2001). J. Biol. Chem.. 276, 26868-26874.
    7. Wang, L.K. and Shuman, S. (2002). Nucl. Acids Res.. 30, 1073-1080.
    8. Vance, J.R. and Wilson, T.E. (2001). Mol. Cell. Biol. 21, 7191-7198.
    9. Interthal, H. et al. (2005). J. Biol. Chem.,. 280, 36518-36528.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Radioactive Labeling with T4 PNK or T4 PNK (3´ phosphatase minus)
    2. Non-radioactive Phosphorylation with T4 PNK or T4 PNK (3´ phosphatase minus)
    3. End-labeling Protocol

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • NEB Diluent and Buffer Table

  • Web 工具

    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What factors can cause incomplete phosphorylation when using T4 Polynucleotide Kinase?
    2. Can I use T4 Polynucleotide Kinase and T4 DNA Ligase in the same reaction buffer?
    3. How can the rate of phosphorylation be improved when using T4 Polynucleotide Kinase?
    4. Do I need to dephosphorylate prior to labeling?
    5. How much substrate can be phosphorylated in a standard reaction?
    6. How many units of T4 Polynucleotide Kinase should be used for a typical reaction?
    7. How do I inactivate the enzyme?
    8. How to calculate the molarity of ends?
    9. What labels can be used?
    10. Will T4 Polynucleotide Kinase work in rCutSmart Buffer?

5-羟甲基尿苷 DNA 激酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

5-羟甲基尿苷 DNA 激酶（5-HMUDK）将 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到 DNA 聚合链上 5-羟甲基尿苷的羟甲基上。

5-羟甲基尿苷 DNA 激酶 |

产品来源

5-羟甲基尿苷 DNA 激酶分离自大肠杆菌菌株，携带克隆自铜绿假单胞菌噬菌体 M6（Pseudomonas aeruginosa bacteriophage M6）的 htdk 基因。

产品类别:
Kinases Products

应用:
DNA End Modification,
Phosphorylation (Kinase)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0659S     -20    
        5-hydroxymethyluridine DNA Kinase M0659SVIAL -20 1 x 0.05 ml 20,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 37℃ 条件下，当总反应体积为 20 µl 时，30 分钟内能保护 1 µg 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）噬菌体 SP8 基因组 DNA 不被 NcoI-HF 限制性内切酶切割所需的酶量。

    反应条件

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM ATP
    10 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    300 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    80°C for 10 minutes

    单位活性检测条件

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液，1 µg 的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）噬菌体 SP8 基因组 DNA，总反应体积为 20 µl。将反应预混液在 37℃ 条件下温育 30 分钟，然后在 80℃ 条件下温育 10 分钟。通过对后续 NcoI-HF 限制性内切酶切割的保护能力来确定磷酸化程度。使用 2 µl 的 10X rCutSmart 缓冲液和 20 个单位的 NcoI-HF 限制性内切酶来处理反应预混液。37℃ 条件下温育 30 分钟后用琼脂糖凝胶电泳分析。

  • 参考文献

    1. Weigele, P.R., et al. (2017). FASEB. 31,

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for a substrate with 5-hydroxymethyluridine such as bacteriophage SP8 genomic DNA (M0659)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What DNA substrates has 5-hydroxymethyluridine DNA Kinase (5-HMUDK) been tested on
    2. What is the activity of 5-hydroxymethyluridine DNA Kinase (5-HMUDK) at other temperatures, buffers, etc
    3. Can I purchase large amounts of an existing Enzyme for Innovation?
    4. What are Enzymes for Innovation?