Ethachinmate共沉淀剂

Ethachinmate

◆原理

       共沉淀剂 Ethachinmate 是基因工程学的标准时机。作为畅销产品，效果显著。
       Ethachinmate 适用于核酸（DNA 与 RNA）乙醇或 isopropanol 沉淀时的丙烯酰胺系高分子载体溶液，在盐类存在的情况下（例如 ＞0.1 mol/L Sodium Acetate）加上 Ethachinmate 进行酒精沉淀，能得到如下优点。

◆优点・特色

● 可回收微量核酸
   可定量性回收 20 ng/mL 以上的 DNA（＞100个碱基对）及（＞120个碱基）。
● 乙醇沉淀迅速
   无需-20℃或-80℃孵化，添加乙醇后可直接离心。
● 酶反应无障碍
   回收的核酸，在水及缓冲液中容易溶解。混在一起的 Ethachinmate 完全不阻碍酶反应。
● 沉淀可观察到
   由于 Ethachinmate 本身会通过酒精沉淀形成沉淀，因此，即使是在只有微量核酸的情况下，也无需担心重要的样本被冲洗掉。

无DNase，RNase活性测试剂

用一下 DNase 及 RNase free 方法可确认是否含有 Ethachinmate

DNase 实验：向1 μgλ/Hin d III 中加入3 μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时候，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变化。

RNase 实验：向 2 μg 16S 及 23S 的 rRNA 中加入3 μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时后，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变

                      化。

◆使用方法

DNA 或者 RNA 溶液（100 μL）

↓  ←3 mol/L Sodium Acetate（添加），3，3 μL *^1）

↓  ←Ethachinmate 1 μL *^2）

↓  ←涡流

↓  ←2~2.5 倍量的乙醇

↓  涡流 *^3）

↓  10 kg x g 室温下反应5分钟 *^4）

沉淀 *^5）

*1）（氯）盐的最终浓度必须在 0.1 mol/L 以上

*2）每 100μL DNA 或 RNA 溶液中加入1 μL  Ethachinmate。但溶液量为 300 μL 以上时，加入 3 μL 可达到饱和。而且再次进行上述操作时，

       无需添加 Ethachinamte。（若反复添加 Ethachinmate 会导致 DNA 溶液变得黏稠，影响到后面的操作。）

*3）进行充分混匀，可实现微量 DNA 的定量回收。

*4）不必进行冷却。

*5）沉淀可目测。溶解于其他缓冲液等中，可直接作为各种酶底物使用。而且，必须用70%的乙醇进行洗涤。

Q：    有没有 DNase、Rnase 杂质？
A：    没有。Ethachinmate 用以下的方法可以确认无 DNae、RNase 活性。
          Dnase 实验：向1 μg的/Hin d III 中加入3 μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时候，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变化。

          RNase 实验：向2 μg 16S及23S 的 rRNA 中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时后，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认

                                无变化。

Q：    可以使用 RNA 回收吗？
A：    没有问题。

Q：    高效回收的核酸浓度和核酸链长度是多少？
A：    可回收几乎所有的 20 ng/mL 以上的 DNA（100 bp 以上）及 RNA（120 base 以上）。

Q：    260 nm 的吸光度会影响定量吗？
A：    无影响。

Q：    100 μL DNA 溶液对应加入1 μL Ethachinmate。若 DNA 溶液少于 100 μL，应该怎样做才好？
A：    请加入1 μL Ethachinmate。为了 DNA 沉淀可目测，需要 1 μL 以上的 Ethachinmate。另外，3M Sodium Acetate 及 1 μL 的

          Ethachinmate。

Q：    300 μL 以上的 DNA 溶液，Ethachinmate 的添加量是多少？
A：    DNA 溶液为300 μL以上，无论 DNA 溶液的量是多少，都请加入 3 μL Ethachinmate。无需加入过量的 Eth-achinmate。另外，3M  

          Sodium Acetate 请按此比例换算适量添加。

          例：DNA 溶液为 600 μL，则加入 19.8 μL的 3M Sodium Acetate 及 3 μL 的 Ethachinmate。

Q：    DNA 溶液进行2次以上乙醇沉淀时，最好第二次以后也每次加上 Ethachinmate 吗？
A：    Ethachinmate 添加一次无需再添加，如果重复添加 Ethachinmate，DNA溶液会变得黏稠，将阻碍以后的操作。

Q：    冷冻时，会不会影响 Ethachinmate 的效果？
A：    不会。

Q：    高压处理会不会影响 Ethachinmate 的效果？
A：    不会。

Q：    如果用苯酚/氯仿处理含 Ethachinmate 的 DNA 溶液，会不会影响 Ethachinmate 的效果？
A：    不会。

Q：    对电泳模型有没有影响？
A：    没有，但根据电泳条件的不同，数十kbp以上的 DNA 会产生宽频带条。

Q：    对限制性内切酶反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对 T4 DNA Ligase 反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对 AMV Reverse Transcroptase 的 cDNA 合成反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对使用 Taq DNA Polymerase 的 PCR 反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对 Klenow Flagment 反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对大肠杆菌的转化有没有影响？
A：    没有。

Q：    对 in vitro 组装有没有影响？
A：    λ 噬菌体的 in vitro 组装效率稍微下降。

Q：    加入 Ethachinmate，乙醇沉淀会形成核苷酸沉淀吗？
A：    使用 8 mer 及 17 mer 的的低聚核苷酸进行实验，与是否添加 Ethachinmate 无关，回收率没有变化。

Q：    在含有甲酰胺的杂交溶液中有无变性吗？
A：    无变性。

Q：    对 blotting 有没有影响？
A：    没有。

Q：    对序列反应有没有影响？
A：    不影响使用 ABI Prism 377 的周序列反应。对脱氧发的序列反应也没有影响。

Q：    添加 Ethachinmate 是否有助于从管中脱落沉淀？
A：    要看管的材质。比如 Eppendorf 公司制的 Safe-Lock 管有容易脱落的倾向。