V8蛋白酶 V8 Protease

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V8蛋白酶V8蛋白酶                              V8 Protease

V8蛋白酶                              V8 Protease

别名:Endoproteinase Glu C,Staphylococcal Protease Protease V8

CAS NO:66676-43-5

EC NO:3.4.21.19

分子量:约 27000

外观:白色的结晶或结晶性粉末

 

摘要


(蛋白质工程学试剂)(氨基酸序列分析试剂)(序列分析酶)

在温和条件下进行蛋白多肽链的切断,不会引起氨基酸残基侧链的修饰(氧化、卤化、脱酰胺等)。而且,被修饰残基(糖链、类脂体、磷酸、硫酸等的结合部位)的肽一般以完整形态被回收,而且具有良好的回收率。如果采用同样的消化条件可以实现高再现性的分段。使用底物特异性高的酶进行蛋白质的结构分析,可预测氨基酸组成的大体片段数和平均大小,并且重要的是可以避免由于部分切断(非特异性切断),导致分离的复杂化。

本品由 Drapeau 系列的 Staphylococcus aureus( V8 菌株)分离而成,是特异性切断谷酰胺产的羧基侧链的酶。分别切断磷酸系列缓冲液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基侧链、氨系列缓冲液中包含谷氨酸羧基侧链的肽结合酯结合。因为其高底物特异性,本品被用于各种蛋白质序列分析时的肽分段。



特异性


切断氨缓冲液中包含谷氨酸羧基侧链的肽结合和酯结合。切断磷酸缓冲液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基侧链的肽结合和酯结合。 

活性:20 units/mg 以上

单位的定义:以 2-Phe-Leu-Glu-4-NA 为底物,在 pH 7.8,25℃ 情况下,1分钟生产1μmol 4-硝基苯胺所需酶的量为1unit。

反应:特异性切断谷氨酸的羧基侧链。

 

使用方法


仅切断谷氨酸羧基


在 0.01~0.1 mol/L 碳酸氢铵(pH 7.8)或者在 0.01~0.1 mol/L 醋酸铵(pH 4.0)中,酵素:底物(mol/mol)=1:30~100,在 30~37℃ 情况下,分解 2~24小时。



同时切断天冬氨酸羧基


在 0.01~0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 7.8)中,以同样条件分解。


用途:各种蛋白质的序列分析的肽分段。

pH 情况:

最佳 pH:在pH 3.5~9.5 范围有蛋白酶活性。pH 4.0 及 pH 7.8 时,活性极大(以血红蛋白为底物)

抑制情况:主要抑制剂:DFP

 

使用上应注意


稳定性

pH 值为 4~10 时,物质稳定。冷冻干燥或冷冻,保存时间较长。在 0.2% 的 SDS 中,具有 100% 活性:在 4 mol/L 尿素中,具有 50% 活性。

V8蛋白酶                              V8 Protease

164-13982说明书

参考文献


[1]

Drapeau, G. R., Boily, Y. and Houmard, J.?J. Biol. Chem., 247, 6720 (1972)


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Drapeau, G. R.?Methods in Enzymology, 47, 189 (1977)


[3]

Houmard, J. et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 3506 (1972)


[4]

日本生化学会编:续生化学讲座2,蛋白质化学,上,p268(东京化学同仁)


[5]

日本生化学会编:生化学,57,472(1985)


[6]

Austen, B. M. and Smith, E. L.Biochem. Biophys. Res. Commun., 72, 411 (1976)


[7]

Hitz, H., Schafer, D. and Wittmann-Liebold, B.?Eur. J. Biochem., 75, 497 (1977)


[8]

L'Italien, J. J. and Laursen, R. J.J. Biol. Chem., 256, 8092 (1981)


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Emmens, M., Welling, G. W. and Beintema, J. J.Biochem. J., 157, 317 (1976)


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Ovchinnikov, Yu. A., Lipkin, V. M., Modyanov, N. N., Chertov, O. Yu. and Smirnov, Yu. V.?FEBS Lett., 76, 108 (1977)

Richardson, C., Behnke, W. D., Freisheim, J. H. and Blumenthal, K. M.Biochim.


[11]

Biophys. Acta, 537, 310 (1978)


[12]

Kohmoto, K., Tsunasawa, S. and Sakiyama, F.?Eur. J. Biochem., 138, 227 (1984) Evenberg, A., Meyer, H., Gaastra, W., Verheij, H. M. and deHaas, G. H.  J. Biol. Chem., 252, 1189 (1977)


[13]

Dognin, M. J. and Wittmann-Liebold, B.FEBS Lett., 84, 342 (1977) Fleer, E. A. M., Verheij, H. M. and deHaas, G. H.Eur. J. Biochem., 82, 261 (1978)


14

Kitagawa, Y., Tsunasawa, S., Tanaka, N., Katsube, Y., Sakiyama, F. and Asada, K.?J.Biochem. (Tokyo), 99, 1289 (1986)


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
164-13982 V8 Protease
V8蛋白酶
2 mg 生物化学
050-05941 Endoproteinase Glu-C, Sequencing Grade
测序级谷氨酰蛋白内切酶Glu-C
50 μg 生物化学
056-05921 Endoproteinase Asp-N, Sequencing Grade
测序级天冬氨酰蛋白内切酶Asp-N
2 μg 生物化学

D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

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D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酸钠,不含氨基酸)D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

用于研究细胞自噬



  细胞自噬主要由营养饥饿引起。本产品是不含氨基酸的低营养培养基。将培养基换成本产品,能够使细胞处于饥饿状态。除了氨基酸,其他成分与 D-MEM 相同,比使用 HBSSEBSSD-PBS 效果更好,能够促进细胞自噬作用。


◆测试项目

● 无菌测试

● pH

● 渗透压

● 内毒素

● 支原体测试



组成表

D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)


案例

  培养生成 GFP-LC3 的小鼠成纤维细胞时,将培养基换成本产品,放置 1.5 小时后,可以通过 GFP-LC3 的标识看到大量的细胞发生了自噬。


D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

(资料提供:东京大学医学系研究科分子生物学领域 本田 郁子 老师、水島 老师)

 

相关产品

Anti Rat LC3, Rabbit010-22841 
 
  LC3 由细胞质合成后,立即被切断末端,转化成 LC3-Ⅰ。随后,依次在 E1 酶(Atg7)、E2 酶(Atg3)的作用下,与磷脂结合转化成 LC3-Ⅱ。LC3-Ⅱ 与自噬体膜结合。LC3 作为检测自噬的marker之一被广泛使用。
 <链接>

Anti Human Atg7, Rabbit013-22831 
 

  此为细胞自噬过程中形成自噬体所必须的因子之一。<链接>

Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit(018-22141)

  研究表明该物质与有关细胞自噬的因子结合,它是促进泛素/蛋白酶体分解成自噬蛋白质的蛋白质。<链接>

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
048-33575 D-MEM(High Glucose)with Sodium Pyruvate,  500ml 用于培养细胞

CultureSure® 氨基酸/糖/维生素/无机盐

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CultureSure® 氨基酸/糖/维生素/无机盐

CultureSure® 氨基酸/糖/维生素/无机盐

无动物源培养基添加剂


产品均经过支原体/内毒素/活细菌数检测。

100,000级洁净环境生产

与原材料、制作工序的相关因素变化进行管理,可安心使用。

 

◆氨基酸

产品编号

产品名称

规格

包装

033-23531

CultureSure® L-天门冬酰胺一水物,无动物源

细胞培养

100 g

035-23535

500 g

030-23541

CultureSure® L-天门冬氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

032-23545

500 g

030-23921

CultureSure® L-丙氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

032-23925

500 g

031-24551

CultureSure® L-精氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

033-24555

500 g

038-23601

CultureSure® L-精氨酸盐酸盐,无动物源

细胞培养

100 g

030-23605

500 g

032-23741

CultureSure® L-异亮氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

034-23745

500 g

036-23881

CultureSure® 甘氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

038-23885

500 g

035-23611

CultureSure® L-谷氨酰胺,无动物源

细胞培养

100 g

037-23615

500 g

037-23931

CultureSure® L-谷氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

039-23935

500 g

035-24135

CultureSure® L-谷氨酸钠一水合物

细胞培养

500 g

034-23941

CultureSure® L-胱氨酸二盐酸盐,无动物源

细胞培养

50 g

030-23943

250 g

039-24231

CultureSure® L-半胱氨酸盐酸盐水合物,无动物源

细胞培养

100 g

031-24235

500 g

034-23561

CultureSure® L-丝氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

036-23565

500 g

031-23951

CultureSure® L-酪氨酸二钠盐二水合物,无动物源

细胞培养

50 g

037-23953

250 g

038-23581

CultureSure® L-色氨酸,无动物源

细胞培养

50 g

034-23583

200 g

031-23571

CultureSure® L-苏氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

033-23575

500 g

035-23591

CultureSure® L-缬氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

037-23595

500 g

032-23621

CultureSure® L-组氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

034-23625

500 g

033-23891

CultureSure® L-羟脯氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

035-23895

500 g

039-23751

CultureSure® L-苯丙氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

031-23755

500 g

037-23551

CultureSure® L-脯氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

039-23555

500 g

036-23761

CultureSure® L-甲硫氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

038-23765

500 g

037-23791

CultureSure® L-赖氨酸盐酸盐,无动物源

细胞培养

100 g

039-23795

500 g

031-23711

CultureSure® L-亮氨酸,无动物源

细胞培养

100 g

033-23715

500 g

◆糖

产品编号

产品名称

规格

包装

032-23981

CultureSure® D(+)-葡萄糖,无动物源

细胞培养

100 g

034-23985

500 g

036-24121

CultureSure® D(+)-麦芽糖一水合物

细胞培养

100 g

038-24125

500 g

034-24281

CultureSure® D(+)-甘露糖,无动物源

细胞培养

100 g

036-24285

500 g

◆维生素

产品编号

产品名称

规格

包装

035-24331

CultureSure® myo-肌醇,无动物源

细胞培养

100 g

037-24335

500 g

039-24351

CultureSure® 盐酸硫胺,无动物源

细胞培养

100 g

031-24355

500 g

030-24381

CultureSure® 烟酸,无动物源

细胞培养

100 g

032-24385

500 g

037-24411

CultureSure® (+)-泛酸钙,无动物源

细胞培养

100 g

039-24415

500 g

032-24341

CultureSure® 盐酸吡哆醇,无动物源

细胞培养

100 g

034-24345

500 g

039-24471

CultureSure® 核黄素,无动物源

细胞培养

100 g

035-24473

250 g

032-24461

CultureSure® 叶酸,无动物源

细胞培养

100 g

◆无机盐

产品编号

产品名称

规格

包装

035-24191

CultureSure® 氯化锌,无动物源

细胞培养

100 g

037-24195

500 g

032-24081

CultureSure® 氯化钾,无动物源

细胞培养

100 g

034-24085

500 g

037-24031

CultureSure® 氯化钙,无动物源

细胞培养

100 g

039-24035

500 g

033-24251

CultureSure® 氯化钴(Ⅱ)六水合物,无动物源

细胞培养

100 g

035-24255

500 g

038-24321

CultureSure® 氯化铜(Ⅱ)二水合物,无动物源

细胞培养

100 g

030-24325

500 g

033-24011

CultureSure® 氯化钠,无动物源

细胞培养

100 g

035-24015

500 g

030-24261

CultureSure® 氯化锰(Ⅱ)四水合物,无动物源

细胞培养

100 g

032-24265

500 g

036-24241

CultureSure® 七钼酸六铵四水合物,无动物源

细胞培养

100 g

038-24245

500 g

032-24221

CultureSure® 硫酸鉄(Ⅱ)七水和物,无动物源

细胞培养

100 g

034-24225

500 g

038-24181

CultureSure® 硫酸镁,无动物源

细胞培养

100 g

030-24185

500 g

◆其他

产品编号

产品名称

规格

包装

034-24421

CultureSure® p-氨基苯甲酸,无动物源

细胞培养

100 g

030-24423

250 g

033-23911

CultureSure® 谷胱甘肽(还原型) ,无动物源

细胞培养

50 g

039-23913

200 g

036-24361

CultureSure® 丙酮酸钠,无动物源

细胞培养

100 g

038-24365

500 g

036-23901

CultureSure® L(-)-苹果酸,无动物源

细胞培养

100 g

038-23905

500 g

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灭菌水


产品编号

产品名称

规格

包装

039-24155

CultureSure® 灭菌水

细胞培养级用水。无菌,无内毒素、支原体、热原质

细胞培养

500 mL

 

 


细胞保存液




产品编号

产品名称

规格

包装

039-23511

CultureSure® 冻存液

适用于通用动物细胞的冻存的无血清细胞冻存溶液。本产品含有DMSOBSA

细胞培养

100 mL

031-24051

CultureSure® DMSO

已经过内毒素检测/无菌检测。

细胞培养

10 mL×10

 


◆其他



产品编号

产品名称

规格

包装

033-23391

CultureSure® 10w/v% Polyoxyethylene   Polyoxypropylen

用于细胞培养的非离子表面活性剂。
在昆虫细胞培养中,将其添加入培养基以防止细胞粘连至烧瓶,抑制凝集。

细胞培养

100 mL

037-23372

CultureSure® Albumin蛋白,牛血清源

内毒素水平低,已经过支原体检测

细胞培养

25 g

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级