从植物组织提取RNA试剂盒
ISOSPIN Plant RNA
ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下，RNA吸附于二氧化硅。无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积，内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。
本试剂盒采用离心法去除杂物，在硅胶模上进行 DNase I 处理，提取和纯化高纯度RNA用时仅约１小时。
◆特点
• 高纯度 RNA
离心法去除杂物和硅基质膜上的 DNase I 处理能提取出高纯度RNA。
• 无需使用过滤器
无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。
• 无需苯酚、氯仿
无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。
• 包装附有 DNase I
试剂盒内含有 DNase I （RNase free），不需另外购买。
◆产品列表
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ISOSPIN Plant RNA (50次用量)
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产品
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容量
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保存
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备注
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PT Extraction Buffer
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30 mL x 1支
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室温
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PT Binding Buffer
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40 mL x 1支
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室温
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含乙醇
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PT Wash1 Buffer
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40 mL x 1支
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室温
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含乙醇（清洗液）
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PT Wash2 Buffer
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40 mL x 1支
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室温
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含乙醇（清洗液）
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DNase I (RNase free)
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2,000 units x 1支
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-20°C
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10× DNase I Buffer
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1 mL x 1支
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-20°C
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ddWater (RNase free)
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1 mL x 8支
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室温
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调制DNase I 溶液・洗提
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离心柱
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50 支 x 1袋
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冷藏
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上端组成：吸附柱
下端组成：收集管
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运送方法
NIPPON GENE提供直送服务，将室温品和冷藏品的试剂盒、－20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱，在常温下进行运输。
◆使用实例
Data.1 RNA的回收量标准
本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。
样品
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菠菜（叶）
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0.5 μg RNA/mg 组织
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青花菜（芽）
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1.0 μg RNA/mg组织
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卷心菜（种子）
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1.3 μg RNA/mg组织
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卷心菜（芽）
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1.4 μg RNA/mg组织
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卷心菜（叶）
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0.1 μg RNA/mg组织
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竹子（叶）
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0.3 μg RNA/mg组织
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郁金香（球根）
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0.2 μg RNA/mg组织
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Data.2 从卷心菜（十字花科）种子及从叶子提取RNA
使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子（约 4 mg）和叶（约 30 mg）的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板逆进行转录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。
实验条件
1. 样品量
・种子（约4 mg）
・叶（约30 mg）
2. 变性凝胶电泳
・凝胶：1% Agarose S（甲醛变性）
・RNA添加量：种子（1 μg）/叶（0.5 μg）
・RNA Ladder：与RNA添加量等量
3. 实时qPCR
・试剂：GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
・装置：ABI 7500 Fast
・模板cDNA：以提取出的总RNA为模板进行逆转录
・扩增片段长度：441 bp
・实验次数： n=3
结果
从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明本产品更能有效去除多糖类杂物（图1）。
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卷心菜种子
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卷心菜叶
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图1 吸收光谱
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【RNA添加量】
种子（1 μg）／叶子（0.5 μg）
【Marker】
RNA Ladder(与RNA的添加量等量)
1% Agarose S（甲醛变性）
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图2 变性凝胶电泳
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卷心菜种子
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卷心菜叶
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图3 实时qPCR
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【试剂】
GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
【模板】
以提取出的总RNA为模板进行逆转录
【装置】ABI 7500 Fast
【扩增片段长度】441 bp
【循环数】n=3
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红色： ISOSPIN Plant RNA
绿色： A公司产品
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Data.3 从竹子（禾本科）愈伤组织提取RNA
竹子愈伤组织
（淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成）
使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品，按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时 qPCR。
※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士（现公立大学法人县立广岛大学）提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所 BioResource Center 获得的淡竹培养细胞系Pn（rpc00047）培养形成的。
实验条件
1. 样品量
① 约 65 mg
② 约 50 mg
③ 约 40 mg
2. 琼脂糖凝胶电泳
・凝胶：0.8% 琼脂糖 S/TAE
・RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）
・Marker：OneSTEP Marker6（5 μL）
3. 实时qPCR
・试剂：GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
・装置：ABI 7500 Fast
・模板cDNA：以提取的总RNA为模板进行逆转录
・扩增片段长度：197 bp
・循环数： n=3
结果
从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明更能有效去除多糖类杂物（图1）。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示，ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA（图2）。
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图1 吸收光谱
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图2 变性凝胶电泳
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【凝胶】
0.8% 琼脂糖 S/TAE
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【RNA添加量】
最终提取量的1/10（5 μL）
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【Marker】
OneSTEP Marker6（5 μL）
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【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
【装置】ABI 7500 Fast
【模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录
【扩增片段长度】197 bp
【循环数】n=3
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图3 实时qPCR
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Data.4 从郁金香（百合科）球根中提取RNA
提取液的粘性状态
左：ISOSPIN Plant RNA
右：B公司产品
使用 ISOSPIN Plant RNA 与B公司产品，按照步骤对郁金香球根（100 mg）提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时qPCR。
郁金香球根样品粘性高，提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后，取1.5 mL移至离心管，并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎，右图将离心管倒置比较溶液的粘性。
实验条件
1. 样品量
100 mg
2. 琼脂糖凝胶电泳
RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）
结果
ISOSPIN Plant RNA 也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。
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最终提取量的1/10（5 μl）
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图1吸收光谱
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图2 琼脂糖凝胶电泳
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◆备注
· 本产品仅用于实验研究，不能作医药及其他目的使用。
