产品信息

底物特异性：

图 1：α1-2 岩藻糖苷酶的详细特异性

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0724S     4       α1-2 Fucosidase P0724SVIAL 4 1 x 0.05 ml 20,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Fucα1-2Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的 α-L-岩藻糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  50 mM NaCl
  20 mM Tris-HCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  理论上的: 70000 Da

  单位活性检测条件

  在 10 µl 1X GlycoBuffer 1（添加有 100 µg/ml BSA）反应体系中，将两倍稀释的 α1-2 岩藻糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • p0749-a1-2-4-6-fucosidase-o
  • α1-3,4 岩藻糖苷酶

• 注意事项

  1. 添加 100μ/ml BSA。37℃ 温育
  2. 对硝基苯-α-L-岩藻吡喃糖苷不是本酶底物。
  3. 反复冻融会降低酶活性。推荐的贮存温度已改为 4℃。
  4. 对于特定底物，需对实验进行优化，以确定最佳温育时间和酶浓度。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-2 Fucosidase (P0724)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • Enzymatic removal of N– and O-glycans using PNGase F or the Protein Deglycosylation Mix

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How much exoglycosidase should be used?
  2. Do detergents inhibit exoglycosidases/endoglycosidases?
  3. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  4. What are Glycosidases and their uses?
  5. How much exoglycosidase should be used?

产品信息

α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 是一种具有广谱特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-2、α1-4 和 α1-6 连接的岩藻糖残基。与其它键相比，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 可更有效地切割 α1-6 岩藻糖残基。
• 是重组酶，没有检测到糖苷内切酶或其它糖苷外切酶污染活性
• 无甘油剂型更适合在 HPLC 和质谱分析中获得最佳性能
• 经 SDS-PAGE 和完整 ESI-MS 测定，纯度 ≥ 95%
• 稳定最佳活性可以长达 12 个月

产品来源

该酶克隆自 Omnitrophica 细菌，在 E. coli 中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0749S     4       α1-2,4,6 Fucosidase O P0749SVIAL 4 1 x 0.04 ml 2,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
  P0749L     4       α1-2,4,6 Fucosidase O P0749LVIAL 4 1 x 0.2 ml 2,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol 人源 IgG [GlcNAcβ1-2Manα1-6(GlcNAcβ1-2Manα1-3)Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc(Fucα1-6)-AMAC] 的 G0F 中超过 95% 的岩藻糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 20°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 49 kDa

  单位活性检测条件

  在 10µl 反应体系中，将两倍稀释的 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 与 1 nmol AMAC 标记底物和 1X GlycoBuffer 1 进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-2 岩藻糖苷酶
  • p0709-pngase-f-glycerol-free-recombinant
  • Rapid 快速 PNGase F

• 注意事项

  1. 酶活力单位定义使用 37℃ 作为反应温度，以同时适应糖苷酶消化和 N-糖链测序的操作说明。而 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 的最佳反应温度为 50℃。37℃ 条件下活性降低约 35%。
  2. 为了从具有即时标签的糖链中完全去除核心 α1-6 岩藻糖残基，可能需要更长的温育时间（18 小时）。
  3. 只有将底物剪切至三甘露糖基核心时，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 才对完整的抗体有活性。
  4. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. α1-2,4,6 Fucosidase O Digestion of Released Labeled Glycans Protocol

• 应用实例

  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. what-is-the-difference-between-1-2-3-4-6-fucosidase-and-1-2-4-6-fucosidase-o
  2. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-in-the-presence-of-instant-labelled-glycans
  3. can-i-use-1-2-4-6-fucosidase-o-in-a-double-digest-with-other-exoglycosidases
  4. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-1-3-fucose-residues
  5. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-branched-and-complex-substrates
  6. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-from-an-intact-antibody
  7. what-is-the-optimal-incubation-temperature-for-1-2-4-6-fucosidase-o
  8. what-is-a-good-method-to-re-purify-a-glycan-or-glycopeptide-after-exoglycosidase-treatment3
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  最佳 pH 范围为 4.5–5.5。

  如果单独使用该酶（不同时使用其它糖苷酶），建议温育温度为 50℃。

  若底物为结构复杂的多分支寡糖，可能需要延长温育时间（4 小时至过夜）进行酶切。

产品信息

 

产品来源

该酶克隆自扁桃（Prunus dulcis），在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0769S     4       α1-3,4 Fucosidase P0769SVIAL 4 1 x 0.05 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 μl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-4GlcNAcβ1-3(Fucα1-3)Galβ1- 4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的 α-岩藻糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 56000 Da

  比活度

  75,000 unit/mg

  单位活性检测条件

  在 10 μl 反应体系中，将两倍稀释的 a1-3,4 岩藻糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在添加有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S. T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-3, 4 Fucosidase (P0769)

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the difference between α1-2 Fucosidase, α1-3,4,6 Fucosidase and α1-3,4 Fucosidase?
  2. Can I use α1-3,4 Fucosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  3. Can α1-3,4 Fucosidase cleave core α1-3 fucose residues?
  4. Can α1-3,4 Fucosidase and α1-2,3,4,6 Fucosidase cleave branched and complex substrates?
  5. What are Glycosidases and their uses?
  6. Do detergents inhibit glycosidases?
  7. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  8. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。

  • 从复杂 N-糖链中去除 α1-3 和 α1-4 岩藻糖残基，可能需要提高酶的浓度和延长温育时间。

  • α1-3,4 岩藻糖苷酶可以切割 N-连接糖链外臂上的 α1-3 岩藻糖，但无法去除核心 α1-3 岩藻糖残基。

  • 贮存缓冲液不包含 BSA；建议在反应中添加 BSA 以保持最佳酶活性。