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EnGen Spy Cas9 切刻酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

EnGen® Spy Cas9 切刻酶是 Cas9 核酸酶的突变体，其在 RuvC 核酸酶结构域中引入了点突变（D10A），因而可以产生切刻，但不能切割 DNA（1,2）。与 EnGen Cas9 NLS 切刻酶（NEB #M0646）一样，EnGen Spy Cas9 切刻酶靶向 DNA 切割过程需要与具有 3’ NGG PAM（Protospacer Adjacent Motif）的位点互补的引导 RNA。切刻位点位于与 PAM 序列相对的 DNA 链上。利用 EnGen Cas9 切刻酶近距离地靶向两个目标位点（通常相隔 0-20 bp），产生 DNA 双链断裂，并且降低脱靶效应，让 PAM 向外产生 5´ 突出末端。EnGen Spy Cas9 切刻酶的切刻位点位于与靶标序列相对的 DNA 链上。EnGen Spy Cas9 切刻酶蛋白的 N 端和 C 端都含有 SV40 T 抗原的核定位序列（NLS）。

产品来源

EnGen® Spy Cas9 切刻酶在大肠杆菌中表达为 N 端含 6xHis 标签的融合蛋白。

产品类别:
Genome Editing Products,
Programmable Nucleases Products

应用:
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0650S     -20    
        EnGen® Spy Cas9 Nickase M0650SVIAL -20 1 x 90 pmol 1 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0650T     -20    
        EnGen® Spy Cas9 Nickase M0650TVIAL -20 1 x 500 pmol 20 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    300 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 5 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    • 基因组位点的配对偏移切割
    • DNA 位点特异性切刻

  • 注意事项

    1. 20 µM 约等于 3.2 mg/ml EnGen® Spy Cas9 NLS 切刻酶，1 µM 约等于 0.16 mg/ml。
    2. 本产品兼容稀释缓冲液 B：300 mM NaCl、10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、500 µg/ml BSA 和 50% 甘油溶液，pH 7.4 @ 25℃。

  • 参考文献

    1. Mali, P., et. al. (2013). NatBiotech. 31 (9), 838-8.
    2. Ran, FA., et. al. (2013). Cell. 154 (6), 1380-9.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. In vitro digestion of DNA with EnGen Spy Cas9 Nickase (M0650)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between EnGen Cas9 Nickase NLS, S. pyogenes (M0650) and EnGen Spy Cas9 NLS (M0646)?
    2. Which nuclear localization signal is fused to EnGen Cas9 Nickase NLS, S. pyogenes?
    3. Why does binding efficiency differ between two different guide RNAs?
    4. Does NEB offer synthetic sgRNAs or plasmids for cloning?
    5. How should offset sgRNAs be oriented for efficient modification using EnGen Cas9 Nickase NLS, S. pyogenes?
    6. Why do I observe incomplete digestion?
    7. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
    8. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?