血蓝蛋白（KLH）（T细胞依赖性抗原）

大鼠免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒

 

　　药品的免疫毒性实验相关方针ICH S8中推荐在无特定免疫毒性标靶情况下进行的T细胞依赖性抗体生产实验（TDAR、T cell Dependent Antibody Reaction）。TDAR被称为T细胞依赖性抗原。例如：通过KLH（Keyhole limpet hemocyanin）的投放对一次抗原刺激而生产IgM性状抗体。接下来进行二次抗原刺激后通过类别转换作用可观察到产生IgG性状抗体。由于本试剂盒可简便测定大鼠血液中IgM性状的抗KLH浓度，所以十分符合上文所述的目的。可与大鼠抗KLH-IgG检测试剂盒配套使用。

◆特点

●　测定时间短（总反应时间：2小时20分钟）

●　微量样本即可测定。

●　使用无害的防腐剂。

●　全部试剂为溶液即用类型。

●　高测定精度和高重复性。

 

◆试剂盒组成

组成品	状态	包装
KLH包被96孔板	清洗后使用	96 wells（8×12）/1个
抗KLH大鼠IgG标准溶液（300 ng/mL）	稀释后使用	200 μL/1瓶
缓冲液	直接使用	100 mL/1瓶
HRP结合抗大鼠IgG抗体	稀释后使用	100 μL/1瓶
显色液（TMB）	直接使用	12 mL/1瓶
终止液（1M H2SO4） ※小心轻放	直接使用	12 mL/1瓶
浓缩清洗液（10×）	稀释后使用	100 mL/1瓶
孔板密封膜		3个
产品说明书		1本

 

◆物种交叉性

3000 ng/mL时数据—：无交叉性

动物种类	对象物质	反应性及反应率（%）
大鼠	IgG	100
	IgM	―
	IgA	―
	IgE	―
小鼠	IgG	―
	IgM	―
	IgE	―

 

◆样本信息

●　大鼠血清·血浆

●　50 μL/well（稀释样本）

※　用附带的缓冲液将样品稀释至标准曲线范围内。

※　为了避免非特异反应发生，请将样本稀释500倍以上。

 

◆测定范围

0.47~30 ng/mL（标准曲线范围）

 

◆实验数据

精密度实验（实验内变化）

样本	A	B
1	11.2	3.93
2	11.0	3.74
3	11.3	3.83
4	11.1	3.70
5	11.5	3.99
Mean	11.2	3.84
SD	0.190	0.121
CV（%）	1.7	3.2

单位：ng/mL

重复性实验（实验间变化）

测定日/样本	E	F	G
0天	15.3	3.84	0.969
1天	15.3	3.84	0.954
2天	15.4	3.83	0.958
3天	15.2	3.82	0.976
Mean	15.3	3.83	0.965
SD	0.0615	0.0067	0.0102
CV（%）	0.40	0.18	1.1

单位：ng/mL，n=4

添加回收实验

样本C

添加量	实测值	回收量	回收率（%）
0.00	1.18	—	—
0.466	1.65	0.470	101
1.40	2.53	1.35	96.4
2.33	3.48	2.30	98.7

单位：ng/mL，n=2

样本D

添加量	实测值	回收量	回收率（%）
0.00	12.5	—	—
4.90	17.2	4.70	95.9
10.7	23.1	10.6	99.1
15.4	27.2	14.7	95.5

单位：ng/mL，n=2

稀释直线性实验

2个血清样本连续用稀释缓冲液稀释3个梯度测定结果，直线回归值R²=0.9992~0.9998