亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

发表于由
  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

重组蛋白纯化用

亲和标签抗体结合磁珠

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

◆抗DYKDDDDK tag抗体磁珠


　　已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白。

 


特点


●　非特异性结合少

●　可回收N端、C端、Internal全部蛋白

●　可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱

●　无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液



1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的性能

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用
可在不依赖标签位置的情况下，回收重组蛋白。

把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。

经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。
 
M : 标签蛋白
Met : N-terminal Met-DYKDDDDK-BAP
N : N-terminal DYKDDDDK-BAP
C : C-terminal DYKDDDDK-BAP

2. 洗脱法比较抗原回收性能

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用
 SDS和DYKDDDDK肽均能洗脱抗原

将DYKDDDDK标签融合蛋白加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。

用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。
 
M：Marker蛋白
Lane1：添加2×SDS sample buffer后，煮沸
Lane2：DYKDDDDK peptide(200 μg/mL)
Lane3：4% SDS solution

3. 非特异性吸附蛋白的比较


亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白。

用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。

无法检测出非特异性吸附质。

 


产品名称

子类
  克隆号

规格

产品编号

包装

DYK标签：DYKDDDK

抗DYKDDDDKtag抗体磁珠

Anti DYKDDDDK tag Magnetic Beads

小鼠 IgG2b

1E6

免疫化学用

011-25154

200 μL

017-25151

2.5 mL

013-25153

2.5 mL×5

 溶液组成：10 mg/mL Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads, 1×TBS(pH 7.4), 50 w/v % glycerol, 0.05 w/v % 　　　　　 sodium azide


◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody,   Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白, 单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody
  抗GAPDH, 单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型）

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液（不含EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化※

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点（pI）

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

（KD（M））

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

（培养上清）

+

+

+++++

背景

（细胞裂解物）

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

–

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点（pI）

3.97

4.00

3.56

–

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

单抗边界强度

（KD（M））

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

（培养上清）

++++

+++

+++

++++

背景

（细胞裂解物）

++++

++++

+++

++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级