无动物参与的皮肤致敏试验方法
ADRA试剂盒
ADRA（Amino acid Derivative Reactivity Assay，氨基酸衍生物反应法）是应用了N-（2-（1-naphthyl）acetyl）-L-cysteine【NAC】和α-N-（2-（1-naphthyl）acetyl）-L-lysine【NAL】的化学品皮肤致敏试验方法，能替代原有的动物检测方法。

无动物参与的皮肤致敏试验方法

ADRA试剂盒

 

　　ADRA（Amino acid Derivative Reactivity Assay，氨基酸衍生物反应法）是应用了N-(2-(1-naphthyl) acetyl)-L-cysteine【NAC】和α-N-(2-(1-naphthyl) acetyl)-L-lysine【NAL】的化学品皮肤致敏试验方法，能替代原有的动物检测方法。

　　使用本试剂盒能使ADRA试验更简便、顺利地进行。

 

◆原理

　　ADRA原理的是先让被测物质和NAC、NAL在25℃下反应24小时，然后分别对反应溶液中剩余的NAC和NAL的浓度进行定量，最后评估皮肤是否发生过敏现象。

 

◆优点

●　在相对长的波长下（281 nm）检测NAC和NAL，可防止待测样品和亲核试剂的共洗脱。

●　ADRA试验所需反应物的浓度仅为现有方法的1%，可避免沉淀的产生。

●　在HPLC分析前，通过添加终止液（2.5％TFA）来停止反应，因此检测的可重复性好。

●　ADRA试验使用96孔板和多通道移液器，可在短时间内测定多个样品。

 

◆试剂盒组成

试剂名称	容量	包装
NAC	10 mL用	2瓶
NAL	10 mL用	2瓶
NAC 缓冲液 (pH 8.0) （预混合）	300 mL用	2瓶
NAL 缓冲液 (pH 10.2) （预混合）	300 mL用	2瓶
0.01 mol/L EDTA溶液	1 mL	2瓶

 

 

◆使用方法

　　用水将预混合缓冲液溶解，再将NAC和NAL溶于其中，然后在96孔板与待测物反应24小时后，通过HPLC即可进行分析。

　　预混缓冲液、NAC和NAL都已经按照反应所需的量分装好，只需进行溶解即可用于ADRA试验。

 

◆其他需要用到的试剂·实验器材

试剂

产品编号	产品名称	规格	包装
204-02743	Trifluoroacetic Acid 三氟yi酸	和光特级	25 mL
015-08633	Acetonitrile 乙腈	高效液相色谱仪用	3 L
217-01031	Ultrapure Water 超纯水*	超微量分析用	1 L
016-00346	Acetone 丙酮* *	试剂特级	500 mL
043-07216	Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜	试剂特级	500 mL

* 蒸馏水或更高级别的水（ADRA试验需要使用金属含量低的水。）

* * 请勿在被测物质溶于水或乙腈时使用。

※ 需要用苯yi醛 (CAS RN^® 122-78-1)作为阳性对照化合物。

 

实验器材

●　电子天平：精确到0.1 mg

●　微量移液枪：量程为2～10 µL、10～100 µL和100～1000 µL的3种移液枪

●　12道移液枪：量程为50～150 µL

●　HPLC系统：配套96孔用遮光自动进样器，以0.3 mL/min流速进样

●　UV检测器：二极管阵列检测器（PDA检测器）或吸光度检测器（281 nm）

●　HPLC柱：CAPCELL CORE C18 column（2.7 µm, 3.0×150 mm）【产品编号：51112】或同类型产品

●　pH计：pH可读取到±0.01，并配套校准用缓冲液

●　孵育箱：温度可设定为25℃

●　96孔板

●　500 mL PE瓶

●　试管混合器

●　微孔板封板膜：岛津GLC封板膜【产品编号：568-RES001】或同类型具有高密封性和耐溶剂性的产品

●　微孔板振荡器

●　微孔板离心机

※ADRA中用到的所有容器或器具（HPLC组件除外），要求使用PP或PE制的一次性用品。金属离子的混入会使NAC二聚化从而导致无法正确进行评估。

 

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	包装
296-80901	ADRA Kit ADRA试剂盒	for Skin Sensitisation Test 皮肤致敏检测用	1 kit

 

 ADRA试剂盒