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315-06421
ISOGEN PB Kit
从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒
ISOGEN PB Kit 20次用量
ISOGEN PB Kit 用于从石蜡包埋组织切片提取RNA。
脱石蜡后，从经Proteinase K 处理过的组织用ISOGEN-LS提取RNA只需2 小时左右。提取出的RNA可用于RT-PCR。
◆特点
• 从石蜡包埋组织切片提取RNA
• 操作简便，且用时少（2小时）
• 提取的RNA可用于RT-PCR
◆用途
• RT-PCR 检测RNA 病毒
• RT-PCR 检测mRNA
• 检测石蜡包埋组织切片的RNA 保存度等
◆产品内容
产品
包装
备注
Proteinase K（20 mg/ml）
100 µl x 1
Extraction Buffer
3 ml x 1
可室温保存
Extraction Buffer 可能出现白色结晶，非质量问题。在37～50°C条件下，孵化后，结晶完全溶解后使用。ISOGEN-LS
10 ml x 1
非医疗用剧毒物
可冷藏保存（2～10°C）
Ethachinmate
60 µl x 1
可冷藏保存（2～10°C）
Deoxyribonuclease（RT Grade）
20 µl x 1
10X DNase（RT Grade）Buffer II
100 µl x 1
Stop Solution（RT Grade）
100 µl x 1
DEPC treated Water
500 µl x 2
可室温保存
保存方法
冷冻保存（-20°C）
试剂盒以外必需的试剂
• Lemosol® 或Lemosol® A
• 乙醇
• 氯仿
• 异丙醇
◆使用实例
操作前需知
从石蜡包埋组织提取RNA时， RNA的分解持续到包埋过程，其RNA的完整性比从新鲜组织提取的RNA低。
从哺乳动物的新鲜组织提取的total RNA经过电泳后，检测出明亮的28S rRNA和18S rRNA条带，其比例约为2 : 1。使用石蜡包埋组织进行提取时，无法得出这个结果。实际上，使用小鼠的石蜡包埋组织进行提取实验，几乎无法检测28S rRNA。因此，在包埋过程中引导RNA分解。石蜡包埋状态关系到RNA的分解程度。有可检测出18S rRNA的石蜡块，也有18S rRNA降解太多而无法检测出来。Nippon Gene将判断基准设定为剩余一个18S rRNA，in situ hybridization等、需要高保存度RNA时，建议设定标准。
即使RNA已分解（包括无法确认18S rRNA的情况），可使用RT-PCR检测出基因，使用RT-PCR时，RNA的完整性较好。但是使用石蜡包埋组织切片进行PCR时，扩增效率比一般情况 的低，请注意避免引物长度设置过大（400 bp以下，尽量设置为200 bp以下）。
操作流程
操作实例1 从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取RNA
按照操作流程，从4片10 µm小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片，提取RNA ，取1/4的 量（5 µl），使用1% 福尔马林変性Agarose S 进行电泳。
操作实例2 RT-PCR检测小鼠Gapd基因
从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取500 ng RNA， DNase 处理后，进行RT-PCR，检测出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（Gapd）基因外显子5（258 bp）。
关于微量样本RT-PCR
对于无法得到提取RNA的电泳结果或10 ng 以下的情况，建议添加RT反应補助试剂RTmate，进行逆转录。
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