ES细胞・iPS细胞培养用血清代替物
 
　　本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子，会导致干细胞分化。使用本产品代替血清，可在ES和iPS细胞培养的同时，保持他们的未分化状态，达到稳定培养。
　　本产品不含剧毒物质，将其作为普通物质处理。
　　使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞，可用于制备嵌合体小鼠，并确认其种系传递.
 
 
◆特点
 
　　●可用于嵌合体小鼠制备，并确认其种系传递。
　　●作为血清替代品，用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。
　　●不含剧毒物质。
 
 
◆实验项目
 
　　●克隆形成实验（使用小鼠ES细胞D3）
　　●碱性磷酸酶检验实验（使用小鼠ES细胞D3）
　　●无菌实验
　　●pH
　　●渗透压
　　●内毒素
　　●支原体实验
 
 
◆嵌合体小鼠的制备与种系传递 Update!!
 
　　将组装HaloTag^® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞，用含有StemSure^®  Serum Replacement（SSR）的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后，将其注入至ICR小鼠的胚盘胞，并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配，获得F1小鼠。
 
 
◆《嵌合体小鼠》
 
　　收集嵌合体小鼠的血液，用TRITC（四甲基若丹明异硫氰酸盐）对HaloTag^® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag^® 的血液被染色，可确认为嵌合化。
 

 
◆《 F1小鼠》
 
　　F1小鼠的血液发现HaloTag^® 存在，可确认用SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。
 
 
＜数据提供　　筑波大学生命科学动物资源中心三輪佳宏老师＞
HaloTag^® 为Promega公司的注册商标。
 
 
◆人iPS细胞201B7的培养
《克隆形态与ALP染色》
 
已确认可用StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。
 
 
 
<培养基组成>
　D-MEM/Ham’s F-12 + 20% SSR + 2mmol/l L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5ng/ml bFGF
　
 
◆《未分化标记的发现》
 
　　使用StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养的人iPS细胞201B7株，确认各种未分化标记（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈阳性。
 
◆小鼠ES细胞D3的培养
 
《细胞形态与ALP染色》
　　
　　使用StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养小鼠ES细胞D3，能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽，ALP染色呈阳性。
 
 
《细胞增殖曲线》
　　用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养，比较细胞增殖。
　　如下图所示StemSure^® 系列与A公司有同等的性能。
 
<StemSure^® 系列培养基组成>
　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/lStemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF
　（使用胶原包被的12孔板）
 
《细胞群倍加数*》
　　使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养，检查培养天数与细胞群倍加数的关系。
　　下图显示StemSure^® 系列与A公司产品（含血清）的细胞群倍加数相同。
 
*细胞群倍加数 cell population doubling level，缩写PDL，指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。
　
<培养基组成>
　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF
　（使用胶原包被的12孔板）
 
 
《未分化标记的检测》
　　使用StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养，各种未分化标记（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈阳性。
 
<培养基组成>
　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF
 
《畸形瘤的形成》
　　用StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤，其内部检测出神经组织（外胚叶源）、软骨组织（中胚叶源）、管腔结构纤毛上皮（内胚叶源）。
 
<培养基組成>
　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure^® LIF
 
 

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
197-16775	StemSure® Serum Replacement	500ml	细胞培养用
197-16275	StemSure® D-MEM（High Glucose）with Phenol	500ml	细胞培养用
198-15781	StemSure® 10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution	100ml	细胞培养用
195-15791	StemSure® 50mmol/l Monothioglycerol Solution	100ml	细胞培养用
190-15805	StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution	500ml	细胞培养用
199-16051	StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution	106units	细胞培养用
195-16053	StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution	106units	细胞培养用
195-16031	StemSure® Freezing Medium	100ml	細胞培養用