β-Amyloid ELISA 试剂盒

——定量检测 Aβ40/Aβ42

　 　阿尔茨海默症（Alzheimer’s Disease, AD)，俗称老年痴呆症，其特征是在大脑神经细胞中存在老年斑（Senile Plaques,SPs） 和神经元纤维缠结（Neuro Fibrillary Tangles, NFT），老年斑的主要组成蛋白是 β- 淀粉样多肽（Amyloid Peptide, Aβ）40 和 42(43)，Aβ42 比 Aβ40 更容易发生聚集。因此，蛋白样多肽的聚集开始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出现了 Aβ42 而没有出现 Aβ40 是阿 尔茨海默症的早期特征；出现了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出现则代表进入阿尔茨海默症的晚期阶段。

　　本产品可检测与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β蛋白质（1-40）以及淀粉样蛋白β蛋白质（1-42）的高灵敏度ELISA试剂盒。与以往试剂盒相比较，检测灵敏度提高约10倍，检测范围在0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因为以往产品同样标志抗体Fab’化，非特异性结合降低。由于运用的是武田药品工业株式会社开发的特异性非常高的单克隆抗体，不仅是组织提取液、培养上清液、脑脊髓液，而且以前检测较困难的血浆中Aβ40以及Aβ42亦可高灵敏度检测。

◆优点

●  可检测多种样品类型：脑组织样品，培养基上清样品，脑脊髓液样品， 血浆样品等

●  特异性极强的抗体，避免非特异性结合

　　　    BAN50：Aβ肽N末端1-16特异性

　　　    BNT77：Aβ11-28特异性

 　　  　 BA27：Aβ40 C末端特异性

　　　    BC05：Aβ45 C末端特异性

●  极高的灵敏度，可检测至 pmol 级含量

●  使用此产品的文章已在Science、Biochemistry、Neuron 等多家国际顶尖刊物发表

◆试剂盒构成　　　

抗体包被的微平板                          1块 标准溶液                                        2ml×2支   标准稀释液                                     2ml×2支 清洗液（20x）                               50ml×1支 HRP标记抗体溶液                          12ml×1支 TMB溶液                                        12ml×1支 终止液                                            12ml×1支 密封件                                            3支

① 加入100ul 的标准品和样品，在4 度冰箱中密封过夜。 

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② 加入HRP标记的抗体溶液，在4 度冰箱中孵育。

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③ 加入100ulTMB 溶液室温孵育30 分钟，避光，密封盖子，进行显色反应。

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④ 加入100ul 终止液，测OD450nm值。

◆案例

案例1.人、小鼠血浆的测定

　　使用EDTA2K真空采血管采血，置于5000g、4℃、离心15分钟，分离血浆，使用之前存放于-80℃。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，4倍样本稀释后测定。

　　（*Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的测定使用人β淀粉样蛋白（1-40）ELISA试剂盒WakoⅡ（产品编号：298-64601）以及人/大鼠β淀粉样蛋白（40）ELISA试剂盒WakoⅡ（产品编号：294-64701）。

案例2.小鼠脑组织的测定

　　用2mL的Tris盐水提取12月龄APP转基因小鼠（J20）的脑半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，2倍样本稀释后测定。

　　除了转基因（tg）小鼠，也可测定野生型（wt）小鼠的微量Aβ。

　　（数据提供：东京大学大学院药学研究科 临床药学教室 岩坪教授 桥本助手）

标准曲线

　　用试剂盒附带的标准溶液制作标准曲线。结果显示，在0.1~20.0（pmol/L）范围内，接近于直线。

添加回收实验

　　向血浆中分别加入5、10、20（pmol/L），4倍稀释后记录测定时的回收率（%）（测定值/理论值）。基本显示较高的回收率。

稀释实验

　　将A、C、E的正常人血浆稀释2~16倍后求稀释曲线。结果显示，特别是人/大鼠系列获得了良好的稀释曲线。