从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA

 

      

 

　　ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下，RNA吸附于二氧化硅。无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积，内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。
　　本试剂盒采用离心法去除杂物，在硅胶模上进行DNase I处理，提取和纯化高纯度RNA用时仅约1小时。

 

 

◆特点

 

　　•　高纯度RNA

　　离心法去除杂物和硅基质膜上的DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

　　•　无需使用过滤器

　　无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

　　•　无需苯酚、氯仿

　　无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

　　•　包装附有DNase I

　　试剂盒内含有DNase I （RNase free），不需另外购买。

 

◆产品列表

 

ISOSPIN Plant    RNA (50次用量)
产品	容量	保存	备注
PT Extraction   Buffer	30 ml x 1支	室温
PT Binding   Buffer	40 ml x 1支	室温	含乙醇
PT Wash1   Buffer	40 ml x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
PT Wash2   Buffer	40 ml x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
DNase I (RNase   free)	2,000 units x   1支	-20°C
10 x DNase I   Buffer	1 ml x 1支	-20°C
ddWater (RNase   free)	1 ml x 8支	室温	调制DNase I 溶液・洗提
离心柱	50 支 x 1袋	冷藏	上端组成：吸附柱 下端组成：收集管

 

 

运送方法

 

　　NIPPON GENE提供直送服务，将室温品和冷藏品的试剂盒、－20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱，在常温下进行运输。

 

 

◆使用实例

 

 

 

Data.1　RNA的回收量标准

 

 

　　本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。

 

样品

 

 

菠菜（叶）	0.5 μg RNA/mg 组织
青花菜（芽）	1.0 μg RNA/mg组织
卷心菜（种子）	1.3 μg RNA/mg组织
卷心菜（芽）	1.4 μg RNA/mg组织
卷心菜（叶）	0.1 μg RNA/mg组织
竹子（叶）	0.3 μg RNA/mg组织
郁金香（球根）	0.2 μg RNA/mg组织

 

 

Data.2　从卷心菜（十字花科）种子及从叶子提取RNA

 

 

　 　使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子（约4mg）和叶（约30mg）的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总 RNA为模板逆进行转录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

 

实验条件

 

1.  样品量
　　・种子（约4 mg）
　　・叶（约30 mg）

2.  变性凝胶电泳
　　・凝胶：1% Agarose S（甲醛变性）
　　・RNA添加量：种子（1μg）／叶（0.5μg）
　　・RNA Ladder：与RNA添加量等量

3.  实时qPCR
　　・试剂：GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
　　・装置：ABI 7500 Fast
　　・模板cDNA：以提取出的总RNA为模板进行逆转录
　　・扩增片段长度：441 bp
　　・实验次数： n=3

 

 

结果

 

　　从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明本产品更能有效去除多糖类杂物（图1）。

卷心菜种子	卷心菜叶
图1 吸收光谱

 

 

 

		【RNA添加量】 　　种子（1μg）／叶子（0.5μg）   【Marker】 　　RNA Ladder(与RNA的添加量等量) 　　1% Agarose S（甲醛变性）
图2 变性凝胶电泳

 

 

卷心菜种子	卷心菜叶
图3 实时qPCR

【试剂】 　　GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 【模板】 　　以提取出的总RNA为模板进行逆转录 【装置】ABI 7500 Fast 【扩增片段长度】441 bp 【循环数】n=3

红色：　ISOSPIN Plant RNA 绿色：　A公司产品

 

 

Data.3　从竹子（禾本科）愈伤组织提取RNA

 

 

　　　

　　　　　　　　竹子愈伤组织

　　（淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成）

　 　使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品，按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转 录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

 

　　※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士（现公立大学法人县立广岛大学）提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所BioResource Center获得的淡竹培养细胞系Pn（rpc00047）培养形成的。

 

 

实验条件

 

1.  样品量
　　①　约65 mg
　　②　约50 mg
　　③　约40 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳
　　・凝胶：0.8% 琼脂糖 S／TAE
　　・RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μl）
　　・Marker：OneSTEP Marker6（5 μl）

3.  实时qPCR
　　・试剂：GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
　　・装置：ABI 7500 Fast
　　・模板cDNA：以提取的总RNA为模板进行逆转录
　　・扩增片段长度：197 bp
　　・循环数： n=3

 

 

结果

 

　　从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明更能有效去除多糖类杂物（图1）。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示，ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA（图2）。

 

图1 吸收光谱	图2 变性凝胶电泳

【凝胶】 　　0.8% 琼脂糖 S／TAE

【RNA添加量】 　　最终提取量的1/10（5 μl）

【Marker】 　　OneSTEP Marker6（5 μl）

 

 

 

 

	【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX   【装置】ABI 7500 Fast   【模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录   【扩增片段长度】197 bp   【循环数】n=3
图3 实时qPCR

 

 

 

Data.4　从郁金香（百合科）球根中提取RNA

 

 

　　  　

                  提取液的粘性状态
              左：ISOSPIN Plant RNA
              右：B公司产品

 

　 　使用ISOSPIN Plant RNA与B公司产品，按照步骤对郁金香球根（100mg）提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆 转录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

　　郁金香球根样品粘性高，提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后，取1.5ml移至离心管，并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎，右图将离心管倒置比较溶液的粘性。

 

 

实验条件

 

1.  样品量

　　100 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳
　　RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μl）

 

 

结果

 

　　ISOSPIN Plant RNA也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。

 

	最终提取量的1/10（5 μl）
图1吸收光谱	图2 琼脂糖凝胶电泳