日本和光WakoPPSQ岛津蛋白肽测序仪配套试剂-质谱级赖氨酰肽链内切酶
本产品是质谱分析前处理时Z常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团 C 末端 的多肽，可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。
PPSQ岛津蛋白肽测序仪配套试剂
日本和光WakoPPSQ岛津蛋白肽测序仪配套试剂-质谱级赖氨酰肽链内切酶
本产品是质谱分析前处理时zui常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团 C 末端 的多肽，可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸 基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。
来源：细菌
外观：冻干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH 8）
活性：0.03～0.07AU/vial
分子量：27,000(琼脂糖过滤)，30,000（SDS-PAGE）
溶解性：溶于水或缓冲液
稳定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris缓冲液中，可在4℃稳定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。
zui适pH值:9.0~9.5
等电点：6.9~7.0
底物特异性：
可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA
抑制剂：DFP，PMSF，TLCK
◆特点
● 高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析
● 提高裂解效率、增加肽段数量
● 根据使用量特意制备小包装，方便使用
◆应用
分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp 与Lep联用进行胶内酶切的效果比较。
牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lep 和Lep+Tp 进行酶切，再用MALDI-TOFMS 法进行分析。
这些蛋白酶的实验效果见下表。
表 1：Tp、Lep 和 Lep+Tp 的结果对照
这些结果表明 Lep 酶解的错误裂解率zui低。Tp 酶解时加入 Lep 后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。
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Tp |
Lep |
Lep +Tp |
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裂解位点 |
精氨酸和赖氨酸的C端 |
赖氨酸的C端 |
精氨酸和赖氨酸的C端 |
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错误裂解率 ( 错误裂解所占比例 ) |
多(8%) |
很少(0%) |
少(3%) |
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鉴定出的多肽数量 |
17 |
19 |
22 |
胰蛋白酶 (Tp)( 图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lep)+Tp ( 图 b) 酶切后的质谱结果对照图。
Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。
( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )
赖氨酰肽链内切酶
赖氨酰肽链内切酶，zui初由Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。
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外观 |
冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8） |
活性 |
见包装 |
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分子量 |
27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE) |
溶解性 |
易溶于水或缓冲液 |
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zui佳pH |
9.0-9.5（酰胺酶的zui佳活性pH） |
等电点 |
6.9-7.0 |
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抑制剂 |
DFP、PMSF、TLCK |
来源 |
细菌 |
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稳定性 |
溶于pH 值5.0-12.0 的缓冲液中，可于4℃稳定保存。溶于pH 值6.0-11.0 的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。 |
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单位定义 |
一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量。 |
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底物特异性 |
水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA |
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非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA |
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 125-05061 | Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级 |
20μg x 5 | 质谱级 | – |
| 125-02543 | Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 |
1vial(2AU) | for Biochemistry | – |
| 129-02541 | Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 |
1vial(10AU) | for Biochemistry | – |