药典收录的内毒素检测法–凝胶法・比色法・比浊法

　　鲎试剂与内毒素反应产生凝胶，这种方法被称为凝胶法。

　　另外，以光学变化为指标的光学检测法包括在凝胶化的过程中以浊度变化为指标的比浊法，以通过合成底物的水解作为指标的比色法。

 

凝胶法：以鲎试剂产生凝胶为指标的检测法

比色法：以合成底物的水解引起显色变化为指标的光学检测法

比浊法：在凝胶的过程中以浊度变化为指标的光学检测法

◆凝胶法

　　将鲎试剂和样品在试管中混合，并在37±1℃下加热60±2分钟，操作过程中避免摇晃。加热后立即将试管缓慢倒转180°，如果形成不变形不塌陷的凝胶，则结果为阳性，如果未形成凝胶则结果为阴性。等比稀释（通常为2倍）样品，判断在几倍稀释率内结果都为阳性。判定为阳性的最大稀释率（或最小浓度）被称为终点。

 

对应试剂

■  ES-Ⅱ系列

　　本系列试剂符合日本药典验证试验的特异性内毒素（不与（1→3）-β-D-葡聚糖反应）检测鲎试剂。胶凝灵敏度为0.015 EU/mL。试剂分为单次型和多次型。

■  ES-F系列

　　本系列试剂的成分和制法与ES-Ⅱ系列相同，并且已经获得FDA认证，可执行符合FDA的验证试验。是一种特异性内毒素检测鲎试剂。胶凝灵敏度为0.015 EU/mL。试剂分为单次型和多次型。

■  J、F系列

　　J系列试剂是符合日本药典验证试验的鲎试剂，F系列试剂是符合FDA验证试验的鲎试剂。两种试剂都会与(1→3)-β-D-葡聚糖发生反应。可以根据内毒素浓度选择胶凝灵敏度分别为0.03 EU/mL或0.25 EU/mL的产品。试剂分为单次型和多次型。

 

◆比色法

　　比色法通过显色合成底物的分解来检测由内毒素引起的鲎试剂的活化。由于P-硝基苯胺的黄色色度是通过405nm附近的吸光度变化来测量，因此，如果样品在405nm附近有较大的吸收度，则本方法不适用。

 

对应试剂

■  Color KY系列

　　本系列试剂是符合日本药典验证试验的特异性内毒素比色法试剂。

　　本系列试剂包括能与Toxinometer^®（BL2型）组合进行动态-比色法的单次型试剂，以及使用Toxinometer^®或酶标仪进行动态-比色法检测的多次型试剂。

　　只需使用最低浓度的试剂即可进行高灵敏度检测，这是FUJIFILM Wako产品的一大特点。（单次型试剂的检测限度为0.0002 EU/mL，多次型试剂的检测限度为0.0005 EU/mL）

 

◆比浊法

　　比浊法是利用凝胶产生的浊度变化来检测内毒素与鲎试剂反应的方法。本方法不适用于浊度较大的样品。

 

对应试剂

■  ES-Ⅱ系列

　　本系列试剂是符合日本药典验证试验的特异性内毒素检测（不与（1→3）-β-D-葡聚糖反应）鲎试剂。试剂分为单次型和多次型。

■  ES-F系列

　　本系列试剂的成分和制法与ES-Ⅱ系列相同，并且已经获得FDA认证，可执行符合FDA的验证试验。是一种内毒素特异性（不与（1→3）-β-D-葡聚糖反应）鲎试剂。试剂分为单次型和多次型。

■  ES-F/Plate

　　本试剂符合FDA验证试验，是一种内毒素特异性（不与（1→3）-β-D-葡聚糖反应）比浊法用试剂。

　　能配合酶标仪进行动态-比色法检测。

■  J、F系列

　　J系列试剂是符合日本药典验证试验的鲎试剂，F系列试剂是符合FDA验证试验的鲎试剂。两种试剂都会与(1→3)-β-D-葡聚糖发生反应。可以根据内毒素浓度选择胶凝灵敏度分别为0.03 EU/mL或0.25 EU/mL的产品。试剂分为单一型和多类型。

■  HS-T SINGLE

　　本系列试剂是符合日本药典验证试验的内毒素非特异性（能与（1→3）-β-D-葡聚糖反应）鲎试剂。只有单次型试剂。

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