GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

新一代细胞功能和胞内蛋白研究工具——通过HVJ-E将IgG抗体高效导入活细胞内！

◆原理

　　IgG抗体分子与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后，形成HVJ-E载体。利用HVJ病毒衣壳蛋白的侵染能力，在融合蛋白（F）的作用下，直接与细胞融合，将分子转入目标细胞或组织。 　　

　　GenomONE-Neo EX从2007年开始商品化销售，试剂盒内的IgG结合增强剂*，促使IgG分子能够更高效的进入到HVJ-E载体内；正是这个特性，GenomONE-Neo EX系统能够更有效的将IgG分子导入到细胞质内。

　　* 相关 GenomONE-CAb 研发文献： Kondo Y. et al., J. Immunol. Methods, 332,10-17(2008).

◆优点、特色

●　筛查细胞内的抗原抗体反应。

　　通过细胞内抗原抗体反应表现出的中和作用筛选 。

●　先进的胞内抗体导入技术（不同于现有的敲除法）。

　　不同于转录后基因沉默（RNAi干扰等），该方法通过识别蛋白质-蛋白质相互作用或翻译后修饰（添加

　　糖链等）方法，达到特异性抑制不产生非特异性反应（RNAi干扰的脱靶效应等）。

　　不同于转基因表达的方法，该法可快速简单地将大量抗体高效导入活细胞，适用于各种不同类型的研究

●　细胞内功能分析。

　　抗体导入活细胞后，检测目标分子的胞内分布情况。

　　抗体导入活细胞后，抑制或证明目标分子的作用。

　　活细胞成像。

●　用于检查、诊断和治疗。

　　检查和诊断的新一代试剂，利用抗体捕获活细胞内的分子靶标。

　　新一代抗体药，直接作用于细胞内分子靶标。

◆案例、应用

【Anti-α-tubulin antibody导入Hs68细胞】

【抗体】 

　　Monoclonal Anti-α-tubulin, Clone DM1A, Mouse IgG1 (SIGMA, T6199)

【流程】 

　　Hs68: 人包皮成纤维细胞(ATCC-CRL-1635), 1×10⁴ cells/well, 

　　0.5%FCS/DMEM　(8 well-chambered coverglass;Nunc 155411)

●　GenomONE- CAb与Anti-α-tubulinmAb (5μg) 混合后加入细胞 

●　37℃培养2hr

●　清洗细胞 (PBS)

●　固定细胞 (4% PFA; for 15min at r.t., 0.2% Triton X-100; for 5 min at r.t.,1%BSA; o/n)

●　Alexa Fluor 488-Goat Anti-Mouse IgG, F(ab’)2<Invitrogen A11017>

●　清洗细胞 (PBS)

●　SYTO 82 (Invitrogen S11363)

●　激光扫描共聚焦显微镜下观察

抗体与微管蛋白细丝特异性结合细胞核用SYTO82染色（红）

【Anti-NPC (核孔蛋白) antibody导入 HeLa S3细胞】

导入抗体后

　　导入anti-NPC antibody 后24hr，观察到的荧光强度和2hr时相比没有明显变化，这表明抗体可在2hr内捕获NPC，并且形成的复合物在24hr内稳定。

【细胞系】 HeLa S3: 人宫颈癌细胞（ATCC CCL 2.2）

【抗体】 Monoclonal Anti-Nuclear Pore Complex Proteins, Clone 414; Mouse IgG1(SIGMA, N8786)

◆试剂盒组成

Cat.  #	HVJ-E  (inactivated HVJ) Freeze-dried 0.26 mL /vial  (when reconstituted)	ReagentⅠ  (antibody incorporation  enhancer)  Freeze-dried 0.26 mL/vial (when  reconstituted)	ReagentⅡ        (incorporation 　 reagent) 0.3 mL/vial	ReagentⅢ        (introduction 　enhancer) 1 mL/vial	Buffer (for suspension 　and dilution) 6.5 mL/vial
ISK-AB001-EX	1  vial	1  vial	1  vial	1  vial	1  vial
ISK-AB004-EX	4  vials	4  vials	1  vial	4  vials	1  vial

*1  vial HVJ-E 最多可转52块8孔细胞培养板

相关资料

◆试剂适用的抗体类型

　　同类型IgG抗体导入到HS-68细胞（人包皮成纤维细胞;   ATCC CRL-1635）的结果

物种	IgG 亚型*1	抗体进入 HVJ-E的效率*2	抗体导入 HS-68细胞的效率*3
小鼠	pAb	◎	△
	IgG1	◎	◎
	IgG2a	○	○
	IgG2b	◎	△
	IgG3	○	△
大鼠	pAb	△	△
	IgG1	◎	○
	IgG2a	△	△
	IgG2b	○	○
	IgG2c	△	△
人	IgG1	◎	○
	IgG2	◎	○
	IgG3	△	△
	IgG4	◎	○
兔子	pAb	○	○
山羊	pAb	△	△

*1：pAb：多克隆抗体，其它：单克隆抗体（对照IgG）
*2：抗体进入   HVJ-E的效率：
  ◎：40％以上，○;20-40％，△;小于20％
*3：抗体导入   HS-68细胞的效率：
  ◎：高效导入，○;可以导入，△;可能导入，但效率低

◆运用GenomONE-CAb导入IgG抗体的细胞类型

物种	细胞系	细胞来源	抗体类型
肿瘤、贴壁细胞
人	HeLa   S3	宫颈癌上皮	小鼠   lgG pAB
			小鼠 lgG 1mAB
人	A549	肺癌	小鼠   lgG 1mAB
人	SAS	舌癌	小鼠   lgG pAB
人	HT1080	纤维肉瘤	小鼠   lgG pAB
人	MCF-7	乳腺癌	小鼠   lgG2a mAB
小鼠	P19	胚胎癌	小鼠   lgG pAB
小鼠	Raw264.7	单核细胞白血病	小鼠   lgG pAB
肿瘤、非贴壁细胞
人	Jurkat	T细胞白血病	小鼠   lgG1 mAB
小鼠	P3-X63-Ag8.653	骨髓瘤	小鼠   lgG1 mAB
正常、贴壁细胞
人	WI-38	肺成纤维细胞	小鼠   lgG1 mAB
人	Hs68	皮肤成纤维细胞	小鼠   lgG1 mAB
小鼠	3T3-L1	胚胎成纤维细胞未分化	小鼠   lgG1 mAB
小鼠	3T3-L1,   adipocyte	胚胎成纤维细胞分化	小鼠   lgG1 mAB
小鼠	BNL   CL2	胚胎肝细胞	小鼠   IgG1 mAb
仓鼠	BHK-21	肾成纤维细胞	小鼠   lgG1 mAB
正常、原代细胞
人	HAEC	主动脉内皮	小鼠   lgG1 mAB
pAb:   多克隆抗体, mAb: 单克隆抗体

◆同系列相关产品

产品编号	产品名称	规格	应用
ISK-GN-001-EX	GenomONE™-Neo EX HVJ-E 1 vial Transfection  Reagents	1 set	DNA、siRNA、ODN及蛋白转染（体内体外适用）
ISK-CF-001-EX	GenomONE™ -CF EX SeV-E（HVJ-E）1 vail Cell Fusion Reagents	1 set	细胞融合试剂