1-3,4 半乳糖苷酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

β1-3,4 半乳糖苷酶又称 BTG，克隆自牛睾丸，是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖末端 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖残基。

1-3,4 半乳糖苷酶 |

产品来源

该酶克隆自牛睾丸，在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

产品类别:
Exoglycosidases Products

应用:
Glycan Sequencing,
Recombinant Glycoprotein Expression,
Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0746S     4    
        β1-3,4 Galactosidase P0746SVIAL 4 1 x 0.05 ml 8,000 units/ml
        GlycoBuffer 4 B1703SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 β-D-甘露糖水解所需要的酶量。

    反应条件

    1X GlycoBuffer 4
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 4
    50 mM sodium acetate
    (pH 4.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    分子量

    理论上的: 71 kDa

    单位活性检测条件

    在 10 µl 1X GlycoBuffer 4 反应体系中，将两倍稀释的 β1-3,4 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

  • 相关产品

    相关产品

    • β1-3 半乳糖苷酶
    • β1-4 半乳糖苷酶 S

  • 注意事项

    1. β1-3,4 半乳糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。
    2. 虽然在自然界中很少见，但实验表明，β1-6 连接半乳糖残基被 β1-3,4 半乳糖苷酶水解的速率远低于 β1-3 或 β1-4 连接半乳糖残基（2）的水解速率。
    3. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。
    4. 酶切底物不同，所需糖苷外切酶的量也不同。在 10-25 μl 的反应体系中，1 μg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的起始量范围为 1-2 µl。如果酶切不完全，可让反应过夜。
    5. β1-3,4 半乳糖苷酶是一种糖基化蛋白。

  • 参考文献

    1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
    2. Distler, J. and Jourdian, G. (1973). J. Biol. Chem. 248, 6772-6780.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Typical Reaction Conditions for β1-3,4 Galactosidase Reaction Protocol (P0746)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between β1-4Galactosidase, β1-4Galactosidase S and β1-3,4Galactosidase? 
    2. Can β1-3,4Galactosidase cleave β1-6 linked galactose residues? 
    3. What is a good positive control for β1-3,4 Galactosidase?
    4. Can I use β1-3,4 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
    5. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
    6. How much exoglycosidase should be used?
    7. What are Glycosidases and their uses?
    8. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
    9. Do detergents inhibit glycosidases?
    10. How much exoglycosidase should be used?

  • 实验技巧

    • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃
    • β1-3,4 半乳糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。而大多数糖苷外切酶的最佳 pH 值为 5.5。
    • β1-3,4 半乳糖苷酶以同等效率释放 β1-3 和 β1-4 半乳糖残基
    • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。