细菌肝素酶 I |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

细菌肝素酶 I 又称肝素裂解酶 I，克隆自埃氏拟杆菌（Bacteroides eggerthii），对肝素和硫酸乙酰肝素的高度硫酸化结构域均有活性。此反应产生含有不饱和糖醛酸的寡糖产物，可通过 232 nm 的紫外光谱检测。

细菌肝素酶 I 切割 N-硫酸氨基己醣与 2-O-硫酸艾杜糖醛酸残基之间，以及与 2-O-硫酸葡萄糖醛酸残基之间的糖苷键。2-O-硫酸糖醛酸残基对细菌肝素酶 I 的活性至关重要，GlcNS 的 6-O-硫酸化不会抑制酶活性。

细菌肝素酶 I |

产品来源

该酶克隆自埃氏拟杆菌（Bacteroides Eggerthii），在 E. coli 中表达。

产品类别:
Heparinases Products

应用:
Analysis of Heparin/HS

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0735S     -80    
        Bacteroides Heparinase I P0735SVIAL -80 1 x 0.02 ml 12,000 units/ml
        Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • P0735L     -80    
        Bacteroides Heparinase I P0735LVIAL -80 1 x 0.05 ml 12,000 units/ml
        Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 100 μl 总反应体系中，pH 7.0，30℃ 条件下，每分钟能从猪黏膜肝素中释放 1.0 μmol 不饱和寡糖所需的酶量。

    反应条件

    1X 细菌肝素酶反应缓冲液
    Incubate at 30°C

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    5 mM CaCl2
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    100°C for 1 minute

    分子量

    实际: 42 kDa

    单位活性检测条件

    在 100 μl 反应体系中，将两倍稀释的细菌肝素酶 I 与 1 mg/ml 猪黏膜肝素底物（1X 细菌肝素酶反应缓冲液）进行温育。在 30℃ 条件下温育反应预混液。通过 232 nm 处的实时紫外光谱检测，确定不饱和寡糖的释放情况。

  • 相关产品

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    • 细菌肝素酶 II
    • 细菌肝素酶 III

  • 注意事项

    1. 避免反复冻融。
    2. 反应条件：
      1. 在 100 μl 总反应体系中，将 10 μl 1 mg/ml 肝素底物、10 μl 细菌肝素酶反应缓冲液和水混合。
      2. 添加 1 μl 细菌肝素酶 I。
      3. 在 30℃ 条件下，将反应体系温育 1 – 24 小时（监测 232 nm 处的吸光度，确定发生部分或完全消化）。

      对于特定底物，必须根据实际经验确定最佳温育时间和酶浓度。

  • 参考文献

    1. Landry, D. et al New England Biolabs, Inc.. Unpublished observation
    2. Yamada, S., Murakami, T., Tsuda, H., Yoshida K., Sugahara, K. (1995). J. Biol.Chem. 270, 8696-8705.
    3. Merchant, Z.M., Kim, Y.S., Rice, K.G., Linhardt, R. (1985). J. Biol.Chem. 229, 369-377.

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are Bacteroides Heparinase Enzymes?
    2. What is the difference between Bacteroides Heparinase I, II and III?
    3. Can Bacteroides Heparinase I, II, and III be used together in one digest?
    4. What is the optimal pH range for Bacteroides Heparinase I?
    5. Is Bacteroides Heparinase I activated by Calcium?

  • 实验技巧

    细菌肝素酶 I 切割高度硫酸化的肝素/HS 链

    细菌肝素酶 I 在 pH 6.5 – 7.5 之间的活性最大

    细菌肝素酶 I 具有钙依赖性，在 1.5 – 5 mM CaCl2 条件下具有最大活性。

    细菌肝素酶 I 可以使用肝素酶反应缓冲液，与细菌肝素酶 II 和 III 进行双重消化。