Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

噬菌体展示是一种筛选技术，可将一系列多肽或蛋白展示在噬菌体病毒颗粒的表面，而编码这些多肽或蛋白的遗传物质位于病毒颗粒的内部（1-3）。这在各展示蛋白序列与其编码 DNA 之间产生了物理关联，从而能够通过称为淘选（4）的体外筛选流程，快速筛选出与给定目标分子（抗体、酶、细胞表面受体等）亲和结合的噬菌体展示肽。最简单的淘选流程（图 1）：将展示不同肽的噬菌体库与包被在平板（或磁珠）上的靶分子进行温育，洗掉未结合的噬菌体，再洗脱特异性结合的噬菌体，然后扩增洗脱的噬菌体，并重复上述结合/扩增过程，富集表面展示有与靶分子结合的肽序列的噬菌体。经过 3–4 轮淘选后，通过 DNA 测序和结合试验得到表征单个克隆。

Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 的制备原理是将随机十二肽组合库融合表达于 M13 噬菌体次要外壳蛋白（pIII）的 N 端（5-9）。这种肽后跟随一个直接位于野生型 pIII 序列之前的短间隔序列（Gly-Gly-Gly）。该库包含约 10 亿个电穿孔序列，在提供的 10 μl 噬菌体中经扩增一次，每个序列即可产生约 100 个拷贝。

展示肽形式：X12-GGG-野生型 M13 pIII

图 1：对 pIII 上展示的五价肽库进行淘选。

Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 |

 
产品类别:
Protein Tools Products,
Phage Display Products

应用:
Protein Analysis Tools,
Phage Display

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E8210S     Multi-temperature    
        Ph.D™.-12 Phage Display Peptide Library Kit v2 E8210-1 -20    
        Ph.D.™-12 Phage Display Peptide Library E8111AVIAL -20 1 x 0.1 ml 1 x 1013 pfu/ml
        E. coli K12 ER2738 E4104SVIAL -20 1 x 0.2 ml Not Applicable
        -96 glll Sequencing Primer (20-mer) S1259AAVIAL -20 1 x 0.05 ml 10 pmol/μl
        DYKDDDDK Mouse mAb E8004AVIAL -20 1 x 0.015 ml Not Applicable
        Protein G Magnetic Beads S1430V 4    
        Protein G Magnetic Beads S1430AVIAL 4 1 x 0.15 ml Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • 即用型复杂噬菌体库；表型与基因型之间的内在关联支持在单个微孔板或 Eppendorf 试管中筛选数十亿个克隆
    • 对照淘选实验无需执行封闭步骤，可避免噬菌体与塑料结合物发生非特异性结合
    • 使用 Protein G 磁珠进行对照淘选实验，可减少繁琐的板/孔冲洗步骤
    • 随机区域的长度（12-mer）便于形成分子内二级结构，并在结合位点之间留出序列间隙
    • 无需使用辅助噬菌体进行扩增
    • 利用简单明了的分子生物学和无菌培养技术，可在不到一周的时间内获得肽结合序列
    • 提供的 -96 gIII 测序引物（500 pmol）可进行 50 次以上测序反应

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    单独销售的组分

    • Ph.D.™-12 噬菌体展示肽库
    • e4104-ecoli-k12-er2738
    • Protein G 磁珠

  • 注意事项

    1. 若要长期贮存（> 30 天）E. coli K12 ER2738，推荐贮存于 -80℃。
    2. Protein G 磁珠应贮存于 4℃，以防冻坏。
    3. 初代试剂盒（NEB #E8110）和二代试剂盒（简称 v2；NEB #E8210）均包含相同的 Ph.D.-12 噬菌体展示肽库组份（NEB #E8111）。
    4. M13 兼容大多数缓冲液条件；不过，洗脱缓冲液可能受制于扩增大肠杆菌所需的培养条件。如果使用二代测序方式，则无需通过扩增来富集噬菌体池。浏览现有文献了解操作流程。
    5. 提供的 -96 gIII 测序引物（500 pmol）可进行 50 次以上测序反应。

  • 参考文献

    1. Sidhu, S.S. (2000). Curr. Opin. Biotechnol.. 11, 610-616.
    2. Rodi, D.J. and Makowski, L. (1999). Curr. Opin. Biotechnol. . 10, 87-93.
    3. Wilson, D.R. and Finlay, B.B. (1998). Can. J. Microbiol.. 44, 313-229.
    4. Parmley, S.F. and Smith, G.P. (1998). Gene. 73, 305-313.
    5. Scott, J.K. and Smith, G.P. (1990). Science. 249, 386-390.
    6. Whaley, S.R. et al. (2000). Nature. 405, 665-668.
    7. Noren, K.A. and Noren, C.J. (2001). Methods. 23, 169-178.
    8. Rozinov, M.N. and Nolan, G.P (1998). Chem. Biol.. 5, 713-728.
    9. Rodi, D.J. et al. (1999). J. Mol. Biol.. 285, 197-203.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Quick Start Protocol PhD Phage Display Peptide Library Kit v2
    2. Panning Protocol 1: Solution-phase Panning with Affinity Bead Capture
    3. Panning Protocol 2: Surface-Phase Panning (Direct Target Coating)
    4. Phage ELISA Binding Assay with Direct Target Coating
    5. Phage Titering
    6. Plaque Amplification for ELISA Samples
    7. Post Panning Protocol 1: Rapid Purification of Single-Stranded DNA Templates for Sequencing Reactions

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE8210_E8211_E8111_E8212

  • 应用实例

    • Ph.D.™ Peptide Display Cloning System

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between the original and version 2 (v2) Phage Display kits?
    2. Which of the three ready-made libraries should I choose?
    3. What is the difference between the three ready-made libraries?
    4. Can a different bacterial strain be used with the Ph.D.™ Phage Display?
    5. No plaques are visible when titering using a Ph.D.™ Phage Display Library.
    6. I am using Ph.D.™ Phage display and the amplified phage titer is low.
    7. I am using Ph.D.™ Phage Display and the phage DNA templates do not yield a readable sequence.
    8. I am using Ph.D.™ Phage Display and the sequencing templates do not run where they should on a gel.
    9. I am using Ph.D.™ Phage Display and after 4 or more rounds of panning all clones are wild-type phage (white plaques).
    10. When performing an experiment using Ph.D.™ Phage Display, the ELISA indicates that background binding to the plate is as high as binding to the target.
    11. When using the Ph.D.™ Phage Display, panning yielded a consensus sequence, but no ELISA signal.
    12. Where can I find references for Ph.D.™ phage display libraries?

  • 问题解决指南

    • Phage Display Troubleshooting Guide (NEB #E8210, #E8211, #E8212)