CLIP-Biotin |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

该产品包含 50 nmol CLIP-Biotin 底物，足以制备 10 ml 的 5 μM 溶液，用于标记细胞中的 CLIP-tag 融合蛋白。

CLIP-tag 是用于蛋白研究的新型工具，能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。CLIP-tag 是一种基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）的小蛋白。CLIP-tag 的底物是苄基胞嘧啶（benzylcytosine，BC）的衍生物。在标记反应中，底物取代苄基部分与 CLIP-tag 的活性半胱氨酸共价结合，形成稳定的硫醚键。尽管 CLIP-tag 与 SNAP-tag®基于相同的蛋白，但与 SNAP-tag 所识别的苄基鸟嘌呤底物不同，CLIP-tag 识别底物为苄基胞嘧啶。CLIP-tag 和 SNAP-tag 可用于进行正交同时标记。

使用该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 CLIP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 CLIP-tag 底物标记融合蛋白。在 CLIP-tag 质粒的产品说明中描述了 CLIP-tag 融合蛋白的表达。有关使用 CLIP-Biotin 进行融合蛋白标记的信息如下所述。

CLIP-Biotin |
图 1：CLIP-Biotin 分子结构（MW 569.7 g/mol）
产品类别:
Biotin Labels Products,
CLIP-tag™ Substrates Products,
Protein Labeling Products

应用:
CLIP Cell,
In vivo Imaging,
Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • S9221S     -20    
        CLIP-Biotin S9221SVIAL -20 1 x 50 nmol Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 CLIP-tag 融合蛋白的细胞
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • DMSO

  • 注意事项

    1. 贮存条件：CLIP-Biotin 应避光贮存在 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存，少于 4 周）条件下。底物应避光和避免受潮。如果妥善贮存在 -20℃ 条件下，底物在干燥状态下至少可保持三年稳定，溶解在 DMSO 中时，至少可保持三个月稳定。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cellular Labeling (S9221)
    2. Labeling of Proteins in vitro (S9221)

  • 应用实例

    • Labeling of Escherichia coli Expressed SNAP-tag® Fusion Proteins

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    体外标记问题解决指南

    溶解度
    如果 CLIP-tag 融合蛋白出现溶解度问题，建议测试 pH 值（pH 5.0–10.0）的范围和离子强度的影响。可能还需要针对特定融合蛋白优化盐浓度（50 – 250 mM）。

    聚集或粘附在试管上导致蛋白损失
    如果出现了融合蛋白粘附问题，建议添加终浓度为 0.05% 至 0.1% 的 Tween 20。CLIP-tag 活性不受 Tween 20 浓度的影响。

    不完全标记
    如果使用推荐的条件未能彻底标记蛋白样品，请按以下操作说明进行修改：在 25℃ 条件下将温育时间延长至 2 小时，或在 4℃ 条件下将温育时间延长至 24 小时；或将标记蛋白溶液的体积减半。这两种方法可以结合使用。如果标记结果仍然不佳，建议使用 CLIP-Vista Green 检查 CLIP-tag 的活性。

    如果在没有 DTT 或其它还原剂的情况下贮存 CLIP-tag 融合蛋白，或在 4℃ 条件下贮存较长时间，其活性可能会受到影响。在 CLIP-tag 融合蛋白的所有溶液中加入 1 mM DTT，并将融合蛋白在 -20℃ 条件下贮存。

    使用少于推荐量的底物原液会大幅降低反应速率。

    目标蛋白活性降低
    如果融合蛋白对降解或活性降低特别敏感，则可尝试减少标记时间或降低标记温度。如果在 4℃ 条件下标记，建议温育过夜。

    细胞标记问题解决指南

    无标记
    如果没有看到标记，极有可能是因为融合蛋白没有得到表达。验证转染方法，确认细胞含有目标融合基因。如果转染方法无误，使用抗 SNAP-tag 抗体（NEB #P9310），通过 Western Blot 法检测 CLIP-tag 融合蛋白的表达。该抗体作用于 CLIP-tag 时表现出高交叉反应性，可用于 Western Blot 法检测。另外，CLIP-Vista Green（NEB #S9235）可用于确认 SDS-PAGE 后细胞提取物中是否存在 CLIP-tag 融合蛋白，无需使用 Western Blot 法。

    标记不足
    标记不足可能是因为融合蛋白与底物的接触不充分。尝试增加 CLIP-tag 底物的浓度和/或延长温育时间。优化蛋白表达也可以改善信号。如果蛋白在细胞中的稳定性有限，在标记后立即分析样品可能对结果有所改善。

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋处理至少 1 分钟整，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度及/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。