CLIP-Surface™ 547 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

该产品包含 50 nmol CLIP-Surface 547 底物，足以制备 10 ml 5 µM CLIP-tag 融合蛋白标记溶液。

CLIP-tag 蛋白标记系统能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。CLIP-tag 是一种基于人 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT）的蛋白。CLIP-tag 的底物是苄基胞嘧啶（benzylcytosine，BC）的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 CLIP-tag 的活性半胱氨酸共价结合，形成稳定的硫醚键。尽管 CLIP-tag 与 SNAP-tag® 基于相同的蛋白，苄基胞嘧啶底物是一类独立的底物，和 SNAP-tag 所识别的苄基鸟嘌呤底物不同。CLIP-tag 和 SNAP-tag 可同时用于同一细胞中两种蛋白的正交和互补标记。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达与 CLIP-tag 融合的目的蛋白；选择 CLIP-tag 底物进行标记融合蛋白。在随 CLIP-tag 质粒提供的产品说明中描述了 CLIP-tag 融合蛋白的表达。介绍了 CLIP-tag 底物在细胞表面标记融合蛋白的方法。

图 1：pCLIP-NK1R 质粒瞬时转染 CHO-K1 活细胞
CLIP-Surface™ 547 |
用 CLIP-Surface 547（红色）标记细胞 60 分钟，并用 Hoechst 33342（蓝色）复染。
图 2：在 pH 7.5 的缓冲液中将 CLIP-Surface 547 与 CLIP-tag 偶联后的激发光谱（虚线）和发射光谱（实线）
CLIP-Surface™ 547 |
CLIP-Surface™ 547 |
图 3：CLIP-Surface 547 结构（MW 851.0 g/mol）
产品类别:
CLIP-tag™ Substrates Products,
Protein Labeling Products

应用:
CLIP Surface,
Pulse Chase,
In vivo Imaging,

Receptor Internalization,
Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • S9233S     -20    
        CLIP-Surface™ 547 S9233SVIAL -20 1 x 50 nmol Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 CLIP 融合蛋白的细胞。可在目标蛋白 N 端或 C 端融合表达 CLIP-tag，但请注意，tag 需要暴露在细胞膜的胞外表面，以便利用 CLIP-Surface 547 进行标记。
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • 荧光显微镜及适用的滤光装置
    • DMSO

    激发

    554nm

    发射

    568nm

  • 注意事项

    1. 贮存条件：CLIP-Surface 547 应避光贮存于 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存，少于 4 周）。底物应避光和避免受潮。如果妥善贮存于 -20℃，干燥贮存的底物至少可保持三年稳定，溶解在 DMSO 中时至少可保持三个月稳定。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cellular Labeling (S9233)
    2. Labeling of Proteins in vitro (S9233)
    3. View the video “Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging” in the Journal of Visualized Experiments (JoVE)

  • 应用实例

    • Simultaneous Fluorescent Labeling of Proteins in Living Cells

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP
    • SNAP-tag® and CLIP-tag™ Substrate Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋至少 1 分钟，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度和/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。