pSNAPf 载体 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

pSNAPf 载体是一种哺乳动物细胞表达质粒，用于 SNAP-tag® 融合蛋白在哺乳动物细胞中的克隆和稳定或瞬时表达。质粒编码有 SNAPf，在 CMV 启动子的调控下表达 SNAP-tag 融合蛋白。表达载体中 SNAPf 下游有一个内核糖体进入序列（IRES）和一个新霉素抗性基因，可用于高效筛选稳定转染子。pSNAPf 载体包含两个多克隆位点，能将融合蛋白表达在 SNAPf 的 N 端或 C 端。

SNAP-tag 是用于蛋白研究的新型工具，能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 是一种基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）的小蛋白。SNAP-tag 的底物是苄基嘌呤和苄基嘧啶的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 SNAP-tag 形成共价结合。

pSNAPf 包含 SNAP-tag 的优化版本，称为 SNAPf。SNAPf 在体外标记中具有更快的动力学特性，在活细胞和固定细胞标记中具有快速、特异和高效的特性，因此是一种理想的分析蛋白质动力学的研究工具。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAPf 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。有关 SNAPf 融合蛋白的克隆和表达，请参阅操作说明。在 SNAP-tag 底物的说明书中描述了如何使用 SNAP-tag 底物标记融合蛋白标。

pSNAP 克隆 区域 pSNAPf 载体 |
pSNAPf 载体 |

编码链上 显示了在 SNAPf 基因两侧区域的 仅有一个识别位点的限制性内切酶。请点击此处下载完整的 pSNAPf 和 对照质粒序列。
产品类别:
Cellular Analysis Vectors Products,
DNA Plasmids & Substrates Products,
Protein Labeling Products

应用:
Snap Surface Products,
Pulse Chase,
In vivo Imaging,

Receptor Internalization,
Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N9183S     -20    
        pSNAPf Vector N9183SVIAL -20 1 x 0.04 ml 500 µg/ml

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    组织培养试剂和培养基
    哺乳动物细胞系
    转染试剂

    序列文件

    Fasta GenBank

  • 优势和特性

    Features

    背景：

    可通过这些指示找到质粒图谱和克隆区域的序列。完整的质粒序列可以下载。该质粒编码基因 SNAPf，SNAPf 是人源烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT）的突变形式。该基因的密码子经优化可用于在哺乳动物细胞中的表达。在质粒序列上，SNAPf 基因编码区域为 969 bp 至 1514 bp 处。

    该质粒用于 SNAP-tag 融合蛋白在哺乳动物细胞中的克隆和稳定或瞬时表达。该方法适用于高效生产表达 SNAPf 基因融合的稳定细胞系。该质粒包含 CMV 启动子，启动子下游为 SNAPf 和新霉素抗性基因，这两个基因序列间被一个脑心肌炎病毒（ECMV）的内核糖体进入序列（IRES）分隔 ，这允许一个信使 RNA 可翻译两个开放阅读框；因此，经新霉素抗性筛选的稳定哺乳动物细胞后，几乎所有存活的菌落都能稳定表达 SNAPf 融合蛋白。除非您的表达实验需要一个纯细胞群，否则您可以直接使用抗性细胞池，或者，可以使用标准程序对细胞克隆进行分离和表征。

    该质粒含有 β-内酰胺酶（氨苄青霉素抗性）基因，用于在细菌中的筛选。目的基因可以克隆在 SNAPf 序列的上游或下游，融合蛋白即可表达在 SNAP-tag 的 N 端或 C 端。pSNAPf 载体也可以作为对照质粒，当单独表达 SNAPf 时，SNAP-tag 蛋白分布在整个细胞中。可以通过 PCR 或直接克隆将 SNAPf 基因从质粒中分离出来，以便将其亚克隆到不同的选择载体中。

  • 注意事项

    1. 贮存条件：pSNAPf 载体保存于浓度为 0.5 µg/µl 的 TE 缓冲液（10 mM Tris-HCl，pH 8.0，1 mM EDTA）中。质粒溶液在 4℃ 条件下贮存可长达一周。建议于 -20℃ 条件下长期贮存。

  • 参考文献

    1. Keppler, A. et al. (2003). Nat. Biotechnol. 21, 86.
    2. Gautier, A. et al. (2008). Chem. Biol. 15, 128.
    3. Keppler, A. et al. (2004). Proc. Natl. Acad. Sci USA. 101, 9955.
    4. Maurel, D. et al. (2008). Nat. Methods. 5, 561.
    5. Jansen, L.E. et al. (2007). J. of Cell Biol. 176, 795.
    6. Krayl, M., Guiard, B. Paal, K. and Vous, W. (2006). Anal. Biol. Chem. 355, 81-89.
    7. Banala, S., Arnold, A. and Johnsson, K. (2008). ChemBio Chem. 9, 38-41.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Expression of SNAPf Fusions (N9183)
    2. Cloning of SNAP-tag Fusions in pSNAPf (N9183)

  • 应用实例

    • Simultaneous Fluorescent Labeling of Proteins in Living Cells

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP
    • SNAP-tag®/CLIP-tag® Cloning Vector Selection Chart

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs
    2. What is the DNA sequence of this product?

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    如果通过细菌转化扩增质粒 DNA，我们建议用于转染哺乳动物细胞的质粒 DNA 使用无内毒素的质粒制备试剂盒进行制备。