SNAP-Cell® Oregon Green® |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

该产品包含 50 nmol SNAP-Cell Oregon Green 底物，足以制备 10 ml 的 5 µM SNAP-tag 融合蛋白标记溶液。

SNAP-tag 是用于蛋白研究的新型工具，能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）。SNAP-tag 的底物是苄基鸟嘌呤和苄基氯嘧啶的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 SNAP-tag 形成共价结合。

 

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。在 SNAP-tag 质粒的产品说明中描述了 SNAP-tag 融合蛋白的表达。有关利用 SNAP-tag 底物进行融合蛋白标记的信息如下所述。

图 1：用 pSNAP-Cox8A（线粒体基因表达）瞬时转染的人骨肉瘤细胞。
SNAP-Cell® Oregon Green® |
用 SNAP-Cell Oregon Green（绿色）标记细胞 15 分钟，并用 Hoechst 33342 复染（蓝色）。
图 2： 
在 pH 7.5 的缓冲液中将 SNAP-Cell Oregon Green 与 SNAP-tag 偶联后的激发光谱（虚线）和发射光谱。 SNAP-Cell® Oregon Green® |
产品类别:
SNAP-tag Substrates Products ,
Protein Labeling Products

应用:
In vivo Imaging,
Protein Localization,
Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • S9104S     -20    
        SNAP-Cell® Oregon Green® S9104SVIAL -20 1 x 50 nmol Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 SNAP-tag 融合蛋白的细胞
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • 荧光显微镜及适用的滤光装置
    • DMSO

    激发

    490nm

    发射

    514nm

  • 注意事项

    1. 贮存条件：
      SNAP-Cell Oregon Green 应避光贮存于 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存，少于 4 周）。底物应避光和避免受潮。如果妥善贮存在 -20℃ 下，干燥贮存的底物至少可保持三年稳定，溶解在 DMSO 中时，至少可保持三个月稳定。
    2. SNAP-Cell Oregon Green 不适用于标记细胞表面 SNAP-tag 融合蛋白。Oregon Green 染料基于氟化荧光素，该荧光素经不带电荷且无荧光的新戊酰基修饰。其进入细胞后即产生荧光，并在细胞中被非特异酯酶水解。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cellular Labeling (S9104)
    2. View the video “Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging” in the Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    3. Labeling of Proteins in vitro (S9104)

  • 应用实例

    • Simultaneous Fluorescent Labeling of Proteins in Living Cells

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP
    • SNAP-tag® and CLIP-tag™ Substrate Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋处理至少 1 分钟整，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度及/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。

    完成漂洗步骤后，在 37℃ 条件下，5% CO2 中额外温育细胞内标记样本 30 分钟，让所有未合并的荧光基团从细胞中扩散开。