SHuffle® T7 E. coli 感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

经基因工程改造的大肠杆菌（E. coli）化学感受态 K12 细胞，可在细胞质中表达含有二硫键的蛋白。适合 T7 启动子驱动的蛋白表达。

重点

  • 经基因工程改造的大肠杆菌（E. coli）K12，可促进细胞质中二硫键的形成
  • 组成性表达二硫键异构酶 DsbC 的染色体拷贝
  • DsbC 促进错误氧化蛋白纠正为正确形式（1、3）
  • 细胞质 DsbC 也是一种分子伴侣，有助于不需二硫键的蛋白折叠（4）
  • 表达 T7 RNAP 的染色体拷贝
  • 通过 lacIq 精确控制表达，从而允许克隆潜在的毒性基因
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA2）、Nit、Str、Spec

基因型

F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB rpsL150(StrR) Δgor Δ(malF)3

产品类别:
SHuffle Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Expression of Difficult Proteins,
Disulfide-bonded Protein Expression,

Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3026J     -80    
        SHuffle® T7 Competent E. coli C3026JVIAL -80 12 x 0.05 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Chloramphenicol 33 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • str
    • nit
    • spec

  • 优势和特性

    Features

    • T7 表达/K12 菌株
    • 在细胞质中正确折叠具有多个二硫键的蛋白的能力更强

    应用特性

    图 1：粗裂解物 vtPA 活性测定：SHuffle® T7 E. coli 感受态细胞 |
    截短型组织纤溶酶原激活剂（vtPA），表达自大肠杆菌（E. coli）细胞质的 pTrc99a 质粒，当正确折叠和氧化时包含 9 个二硫键。诱导后收集细胞并制备粗细胞裂解物。使用显色底物 Chromozym t-PA（Roche #11093037001）测定 vtPA 活性，并使用 Bradford 试剂进行蛋白浓度测定。大肠杆菌（E. coli）wt+ 细胞为 DHB4，是 FÅ113（Origami™）的亲本。
    图 2：从粗裂解物测定的 PfCHT1 几丁质酶活性：SHuffle® T7 E. coli 感受态细胞 |
    在 T7 启动子调控下，表达自质粒的恶性疟原虫几丁质酶（PfCHT1）含三个半胱氨酸。诱导后收集细胞并制备粗细胞裂解物。使用显色底物（CalBioChem #474550）测定 PfCHT1 活性，并使用 Bradford 试剂进行蛋白浓度测定。

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  • 注意事项

    1. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

  • 参考文献

    1. Bessette, P.H. et al. (1999). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 13703-13708.
    2. Qiu, J., Swartz, J.R. and Georgiou, G. (1998). Appl. Environ. Microbiol. 64, 4891-4896.
    3. Levy, R. et al. (2001). Protein Expr. Purif. 23, 338-347.
    4. Chen, J. et al. (1999). J. Biol. Chem. 274, 19601-19605.
    5. Boyd, D. et al. (2000). J. Bacteriol. 182, 842-847.
    6. de Marco, A. (2009). Microbial Cell Factories. 8, 26.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Expression Using SHuffle (C3026)
    2. Transformation Protocol (#C3029, #C3026, #C3028 and #C3030)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • AppNote_Use_of_PURExpress _and_PDBE_to_Express_Active_Proteins_that_can_be_Expressed_in vivo_in_Shuffle_Competent_Cells

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide
    • SHuffle® Strain Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the strain properties (C3026)?
    2. What applications are SHuffle® strains useful for?
    3. Does my protein have disulfide bonds?
    4. Which SHuffle® strain should I use?
    5. Is there anything I can do to increase protein yield when using SHuffle strains?
    6. What are the growth characteristics of the SHuffle strains?
    7. How do SHuffle® strains aid in cytoplasmic disulfide bond formation?
    8. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    9. How should I express my protein of interest in SHuffle?
    10. Does Streptomycin and/or Spectinomycin need to be added when growing SHuffle strains?
    11. Can I conduct M13 phage display experiments in SHuffle strains?
    12. Can I conduct blue/white screening using alpha complementation of lacZ in SHuffle strains?
    13. Which SHuffle strains are resistant to chloramphenicol? Is chloramphenicol required for maintenance of the mini F plasmid?
    14. Do SHuffle cells grow in minimal media?
    15. Are SHuffle strains temperature sensitive?
    16. Is the genome of SHuffle strains available?
    17. Is T7 expression subject to catabolite repression in NEB T7 Express or SHuffle strains?
    18. Can one use SHuffle cells to secrete my protein of interest?