pTWIN1 载体 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

pTWIN1 是一种大肠杆菌表达载体，可与 IMPACT™ 试剂盒（NEB #E6901）结合使用。pTWIN 载体适用于纯化或分离具有 N 端半胱氨酸和/或 C 端硫酯的蛋白（1）。载体中的多克隆位点区设计用于以框内插入方式，将目标基因插入融合到修饰的 Ssp DnaB（2）和 Mxe GyrA 内含肽（3,4）之间。存在源于环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）（5,6）的几丁质结合域有助于纯化过程。此双链载体的长度为 7,375 bp。

pTWIN1 载体 |

DNASU 作为基因质粒克隆和收集的资源中心，也可能有所帮助。

产品类别:
IMPACT System,
Bacterial E. coli Protein Expression Products,
DNA Plasmids & Substrates Products,

Protein Expression Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N6951S     -20    
        pTWIN1 Vector N6951SVIAL -20 1 x 0.05 ml 200 µg/ml

  • 特性和用法

    亲和标签

    几丁质结合域（CBD）

  • 优势和特性

    Features

    • pBR322 衍生载体
    • SapI 位点应该用于插入片段 5´ 和 3´ 末端的定向克隆
    • 融合基因的表达受 T7 启动子（8）控制，并且因 lacI 基因的存在而受 IPTG 调控
    • 表达需要大肠杆菌宿主菌株携带 T7 RNA 聚合酶基因 [例如，T7 表达 E. coli 感受态细胞（高效级）（NEB #C2566）或 BL21(DE3) E. coli 感受态细胞（NEB #2527）及其衍生菌株]（9）
    • 由于源于噬菌体 M13 的 DNA 复制起点，能够通过辅助噬菌体对携带质粒的细胞进行超染，从而产生单链 DNA
    • 硫醇诱导的 Mxe GyrA 内含肽切割取决于与内含肽相邻的氨基酸。建议将 C 端氨基酸残基为 M 或 Y 的目标蛋白与此内含肽结合使用
    • 硫醇诱导的 Ssp DnaB 内含肽可控切割取决于与内含肽相邻的氨基酸。建议将 N 端氨基酸残基为 CRA 或 GRA 的目标蛋白与此内含肽结合使用
    • 氨苄青霉素抗性

  • 相关产品

    相关产品

    • BL21(DE3) E. coli 感受态细胞
    • T7 表达 E. coli 感受态细胞（高效级）

  • 注意事项

    1. 细胞裂解缓冲液：含有 500 mM NaCl 的 50 mM Tris-HCl（pH 8.5）。
      Ssp DnaB 内含肽切割缓冲液：含有 500 mM NaCl 的 50 mM Tris-HCl（pH 6.0）。
      Mxe GyrA 内含肽切割缓冲液：含有 500 mM NaCl 和 50 mM 2-巯基乙磺酸的 50 mM Tris-HCl（pH 8.5）。

  • 参考文献

    1. Evans, T.C., Benner, J. and Xu, M.-Q. (1999). The cyclization and polymerization of bacterially expressed proteins usingmodified self-splicing inteins. J. Biol. Chem.. 274, 18359-18363.
    2. Mathys, S., Evans, T.C., Chute, I.C., Wu, H., Chong, S., Benner, J., Liu, X.-Q. and Xu, M.-Q. (1999). Characterization of a self-splicing mini-intein and its conversion intoautocatalytic N- and C-terminal cleavage elements: facile production of proteinbuilding blocks for protein ligation. Gene. 231, 1-13.
    3. Evans, T.C., Benner, J. and Xu, M.-Q. (1998). Semisynthesis of cytotoxic proteins using a modified protein splicing element. Protein Sci.. 7, 2256-2264.
    4. Southworth, M.W., Amaya, K., Evans, J., T.C., Xu, M.-Q. and Perler, F.B. (1999). Purification of proteins fused to either the amino or carboxy terminus of the Mycobacterium xenopi gyrase A intein.. BioTechniques. 27, 110-120.
    5. Chong, S., Mersha, F.B., Comb, D.G., Scott, M.E., Landry, D., Vence, L.M., Perler, F.B., Benner, J., Kucera, R.B., Hirvonen, C.A., Pelletier, J.J., Paulus, H. and Xu, M.-Q. (1997). Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavableaffinity tag derived from a protein splicing element. Gene. 192, 271-281.
    6. Watanabe, T., Ito, Y., Yamada, T., Hashimoto, M., Sekine, S. and Tanaka, H. (1994). The role of the C-terminal domain and type III domains of chitinase A1 from Bacillus circulans WL-12 in chitin degradation. J. Bacteriol.. 176, 4465-4472.
    7. Wu, H., Xu, M.-Q. and Liu, X.-Q. (1998). Protein trans-splicing and functional mini-inteins of a cyanobacterial DnaB intein. Biochem. Biophys. Acta. 1387, 422-432.
    8. Telenti, A., Southworth, M., Alcaide, F., Daugelat, S., Jacobs, W.R. Jr. and Perler, F.B. (1997). The Mycobacterium xenopi GyrA protein splicing element: Characterization of a minimal intein. J. Bacteriol.. 179, 6378-6382.
    9. Dubendorff, J.W. and Studier, F.W. (1991). Controlling basal expression in an inducible T7 expression system by blocking the target T7 promoter with lac repressor. J. Mol. Biol.. 219, J. Mol. Biol..

操作说明、说明书 & 用法

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • Impact-TWIN Manual E6950-708

  • 应用实例

    • Intein-Mediated Protein Ligation IPL and Labeling with the IMPACT™ Kit

工具 & 资源

  • 选择指南

    • IMPACT™ Vectors and Applications

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is IMPACT?
    2. What is the DNA sequence of this product?