小鼠 RNase 抑制剂 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

小鼠 RNase 抑制剂是鼠源重组蛋白，分子量为 50 kDa。该抑制剂可以特异性抑制 RNase A、B 和 C 活性，它与 RNase 以 1:1 的比例高效非共价结合从而抑制其活性。但对 RNase 1、RNase T1、S1 核酸酶、RNase H 或来源于曲霉属（Aspergillus）的 RNase 无效。此外，与下列聚合酶共同使用时，该抑制剂不会抑制聚合酶的活性，如：Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶或噬菌体 RNA 聚合酶（SP6、T7 或 T3）。

重组小鼠 RNase 抑制剂不含半胱氨酸。已证实，人源 RNase 抑制剂中的半胱氨酸能导致抑制剂对氧化敏感甚至失活（1）。因此，小鼠 RNase 抑制剂与人/猪 RNase 抑制剂相比，抗氧化能力显著提高，且在 DTT 浓度较低（＜1 mM）时也很稳定。这使其在不适宜高浓度 DTT 的反应中更具优势（如： RT-PCR）。

产品来源

携带有鼠源 RNase 抑制剂基因的大肠杆菌菌株。

产品类别:
RNase Inhibitors,
PURExpress,
Cell-Free Protein Expression Products,

cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT),

Protein Expression Products

应用:
NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System,
PURExpress,
Cell-Free Protein Expression,

Protein Expression,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0314S     -20    
        RNase Inhibitor, Murine M0314SVIAL -20 1 x 0.075 ml 40,000 units/ml
    • M0314L     -20    
        RNase Inhibitor, Murine M0314LVIAL -20 1 x 0.375 ml 40,000 units/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指能抑制 5 ng RNase A 50%活性所需的小鼠 RNase 抑制剂的量。活性测定是通过抑制 RNase A 对胞嘧啶 2´，3´ -环单磷酸盐的水解来进行。

    贮存溶液

    20 mM HEPES-KOH
    50 mM KCl
    8 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.6 @ 25°C

  • 优势和特性

    应用特性

    • RT-PCR
    • cDNA 合成
    • 体外转录/翻译
    • 酶催化的 RNA 标记反应
    • 需要完整 RNA 存在的其它应用

  • 注意事项

    1. 由于核糖核酸酶在变性条件下仍能保持活性，因此必须注意避免已与核糖核酸酶形成复合物的 RNase 抑制剂分子变性。为防止活性核糖核酸酶的释放，应避免反应温度超过 50℃和应用高浓度的尿素或其它变性剂。
    2. 反应中建议 RNase 抑制剂的浓度为 1 unit/μl。在建立反应时，RNase 抑制剂应先于其它可能作为 RNase 污染源的组份（如：酶、小提的质粒）加入到反应中。

  • 参考文献

    1. Kim, B.M. et al. Protein Science. 8, 430-434.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Avoiding Rnase Contamination using Murine Rnase Inhibitor (M0314)
    2. Poly(A) Tailing of RNA using E. coli Poly(A) Polymerase (NEB# M0276)

  • 应用实例

    • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

FAQs & 问题解决指南

  • 实验技巧

    该抑制剂的分子量为 50 kDa。它会在使蛋白质变性的条件下失活。

    我们建议在您的反应中抑制剂的用量为 1U/ul。

    抑制剂应先于其它可能成为 RNase 污染源的组份前加入反应。

    抑制剂应在低于 50℃的条件下使用。