产品信息

M.HhaI 晶体（Xiaodong Cheng，冷泉港实验室）

产品来源

大肠杆菌菌株，携带克隆自溶血性嗜血杆菌（Haemophilus haemolyticus）（ATCC 10014）的 HhaI 修饰基因。

产品类别:

Methyltransferases for Epigenetics Products,

Methyltransferases Products

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0217S     -20       Hhal Methyltransferase M0217SVIAL -20 1 x 0.04 ml 25,000 units/ml   rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X   S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM

• 特性和用法

  单位定义

  1 个单位是指在 37℃ 条件下，10 µl 反应体系中，1 小时内能保护 1 µg λ DNA 不被 HhaI 限制性内切酶切割所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Supplement with 80 µM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）
  Incubate at 37°C

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25°C)

  对照保护实验

  HhaI 甲基转移酶与 1 µg λ DNA 在 10 µl 补充了 80 µM S-腺苷甲硫氨酸的 1X rCutSmart 缓冲液中于 37℃ 温育 1 小时，后于 65℃ 温育 15 分钟。HhaI 甲基转移酶的保护能力测定是通过添加 40 µl 补充了 100 µg/ml BSA、10 mM MgCl₂ 和 10 个单位 HhaI 限制性内切酶的 rCutSmart 缓冲液。37℃ 条件下温育 30 分钟后用琼脂糖凝胶电泳分析。

  贮存溶液

  50 mM Tris-HCl
  150 mM NaCl
  5 mM TCEP
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  否

  分子量

  理论上的: 36994 道尔顿

• 相关产品

  单独销售的组分

  • S-腺苷甲硫氨酸（SAM）

• 注意事项

  1. SAM 贮存要求：S-腺苷甲硫氨酸以溶解在 0.005 M 硫酸和 10% 乙醇的 32 mM 溶液形式贮存于 –20℃。满足理想的贮存条件时，此溶液中的 SAM 可保持活性长达 6 个月。SAM 在 37℃，pH 7.5 的条件下不稳定；因此，当反应温育时间超过 4 小时，需补充 SAM。使用新鲜配置的 SAM 可减少影响实验成功的许多问题。

• 参考文献

  1. Hoffman, J.L. (1986). Biochemistry. 25, 4444-4449.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Recommended Protocol for ³H labeling of DNA
  2. Recommended Protocol for Methylation of Genomic DNA

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Is S-adenosylmethionine (SAM) supplied with the Methyltransferase?
  2. What should be considered if the methylation is not going to completion?
  3. What is the molecular weight of HhaI Methyltransferase?
  4. Will any NEB methyltransferases (methylases) work on RNA?
  5. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?