Spy Cas9 核酸酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Spy Cas9 核酸酶 |

Spy Cas9 核酸酶 |

    
Spy Cas9 核酸酶是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可催化双链 DNA 的位点特异性切割。该酶可识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列（1）的 NGG 处，并在靶标序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 序列互补的 DNA 的链上。

体内 Cas9 过程：细菌获得性免疫 Spy Cas9 核酸酶 |
细菌基因组中的 CRISPR 位点被转录并加工成 crRNA。它和另外的 tracrRNA 一起，与 Cas9 核酸内切酶复合物，切割含有与 crRNA 序列互补的外源 DNA，互补序列长度为 20 nt，与 PAM 序列相邻。（图中未按比例绘制。）
Spy Cas9 核酸酶与 sgRNA 形成复合物 Spy Cas9 核酸酶 |
切割位点位于 PAM 序列上游的三个核苷酸处（以红色显示）。PAM 位于与 sgRNA 序列互补的 DNA 的链上。
使用 Spy Cas9 核酸酶 进行体外 DNA 切割Spy Cas9 核酸酶 |
根据推荐条件建立反应体系，用 1% TBE 琼脂糖凝胶分离切割产物。起始 DNA 为 PvuII 线性化的 pBR322 质粒 DNA。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因

产品类别:
Genome Editing Products,
Programmable Nucleases Products

应用:
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0386S     -20    
        Cas9 Nuclease, S. pyogenes M0386SVIAL -20 1 x 90 pmol 1 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0386T     -20    
        Cas9 Nuclease, S. pyogenes M0386TVIAL -20 1 x 500 pmol 20 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0386M     -20    
        Cas9 Nuclease, S. pyogenes M0386MVIAL -20 1 x 2,500 pmol 20 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 2 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    300 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 5 minutes

  • 相关产品

    相关产品

    • EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes
    • EnGen® 突变检测试剂盒

  • 注意事项

    1. 1,000 nM 等于 159 ng/μl。
    2. 如果需要使用高浓度 Spy Cas9 核酸酶（M0386T 和 M0386M）用于体外 DNA 酶切，需要在配制反应体系之前，使用稀释液 B（NEB #B8002S）将酶稀释至 1 µM。

  • 参考文献

    1. Jinek M. et al. (2012). Science. 816-821 doi: 10.1126/Science.1225829. Epub 2012 Jun 28.. PubMedID: 22745249

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. In vitro digestion of DNA with Cas9 Nuclease, S. pyogenes (M0386)
    2. Using recombinant Cas9 nuclease to assess locus modification in genome editing experiments (#M0386)

  • 应用实例

    • Bridging dsDNA with a ssDNA Oligo and NEBuilder® HiFi DNA Assembly to create an sgRNA-Cas9 Expression Vector
    • Protocol for using Recombinant Cas9 Nuclease to Assess Locus Modification in Genome Editing Experiments

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Why do I observe incomplete digestion?
    2. Why does digestion efficiency differ between two SgRNAs?
    3. Does NEB provide plasmids for gRNA cloning?
    4. Does Cas9 Nuclease contain a nuclear localization signal (NLS)? 
    5. Is Cas9 Nuclease fused with a N-terminal 6XHis tag?
    6. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
    7. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?