KLD 酶混合液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

KLD 酶混合液 |    

KLD 酶混合液是含有激酶、连接酶和 DpnI 的特殊混合液。在室温条件下，该混合液能实现有效的磷酸化、分子内连接/环化和模板去除，反应时间仅需 5 分钟。此混合液是 Q5 定点突变试剂盒的组份，并且经过设计，可用于经 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶 PCR 扩增的片段。

Q5 定点突变试剂盒概览
KLD 酶混合液 |
此试剂盒经优化设计，可快速有效地将插入、缺失和替换引入到双链质粒 DNA。第一步是使用常规引物和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶的预混液进行指数扩增。第二步是使用含有激酶、连接酶和 DpnI 的独特酶混合液一起温育。在这些酶的共同作用下，可实现 PCR 产物快速环化，并去除模板 DNA。最后一步是转化到高效级化学感受态细胞（随试剂盒提供）。
产品类别:
DNA Assembly, Cloning and Mutagenesis Kits Products

应用:
Site Directed Mutagenesis,
Site Directed Mutagenesis,
High-throughput cloning and automation solutions

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0554S     -20    
        KLD Enzyme Mix M0554SVIAL -20 1 x 0.025 ml 10 X
        KLD Reaction Buffer B0554AVIAL -20 1 x 0.15 ml 2 X

  • 优势和特性

    应用特性

    • 反应快速（5 分钟）
    • 一种酶混合液中包含三种酶活性（激酶、连接酶、DpnI）

  • 相关产品

    相关产品

    • Q5® 定点突变试剂盒
    • Q5® 定点突变试剂盒（不含感受态细胞）
    • Q5® 超保真 DNA 聚合酶
    • Q5® 热启动超保真 2X 预混液
    • Nuclease-free Water

  • 注意事项

    1. 该产品专为 Q5 超保真聚合酶特异性扩增 dsDNA 片段而设计。
    2. 本产品是 Q5 定点突变试剂盒的配套产品。
    3. 为得到最佳结果，推荐使用 NEB 在线引物设计软件 NEBaseChanger 设计引物并计算退火温度。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. KLD Enzyme Mix Reaction Protocol (M0554)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • NEBaseChanger

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is the KLD Mix (NEB#M0554) the same product as the component of the Q5 Site-Directed Mutagenesis Kits (E0554S and E0552S)?
    2. What polymerases can be used to amplify the fragments that will be phosphorylated and ligated by the KLD mix?
    3. Do I need to purify my PCR-amplified fragments before or after treatment with the KLD mix?
    4. What is the KLD Mix?
    5. If I double my PCR size, should I add more PCR mix to the KLD reaction?
    6. Can I use more than 5μl of the KLD reaction to transform E coli?
    7. Can the KLD reaction be incubated longer or at higher temperature?
    8. I use the Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit to introduce single mutations. How can I introduce multiple mutations?

  • 实验技巧

    转化时仅使用 5 μl KLD 反应液。如果添加更多 KLD 反应液，则应在转化之前进行纯化，例如 PCR 纯化。

    KLD 反应液中仅使用 1 μl PCR 产物。使用过多 PCR 产物可能会降低转化效率。如果 PCR 产量过低，可将更多产物添加到 KLD 反应液中，但必须在转化之前进行纯化，例如 PCR 纯化。

    使用 NEBaseChanger™ 设计引物并计算退火温度

    Q5 定点突变试剂盒问题解决指南

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