mRNA 脱帽酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

mRNA 脱帽酶可以将 mRNA 5´ 末端的 7-甲基鸟苷帽（m7G）结构去除，产生 5′ 单磷酸末端并释放 m7GDP（1）。mRNA 脱帽酶能够使各种长度的 mRNA 脱帽，对 Cap 0 和 Cap 1 的去除效率相同。mRNA 脱帽酶也可将 5′ 三磷酸末端转化为 5′ 单磷酸，但转化效率相对较低。5′ 单磷酸化的 RNA 可用于多种下游应用，包括 5′ RNA 连接酶介导的 RACE、RNA-seq 和 5′-> 3′ 核酸外切酶消化。

mRNA 脱帽酶（MDE）与烟草酸焦磷酸酶（TAP）脱帽活性的比较。

mRNA 脱帽酶 |

（图 A）使用 mRNA 脱帽酶（MDE）或其它品牌的烟草酸焦磷酸酶（TAP）对 500 nM 的 5′ 加帽 RNA（25 nt）溶液进行脱帽反应。每种酶使用各自适合的反应缓冲液，且反应体积相同。其它品牌的 TAP 浓度未知，经比较显示 0.62 单位的 MDE 与 1 µl TAP 的活性相当。使用毛细管电泳对脱帽反应产物进行分析。值得注意的是，在阴性对照中，所用的合成底物中都存在约 10% 的三磷酸 RNA。
（图 B）测试了在其它条件不变的情况下，引入不同长度、不同种类末端的 RNA，是否会影响 MDE 的活性，在反应中添加 500 ng Jurkat 细胞总 RNA。结果显示：MDE 的脱帽活性不受影响，而 TAP 活性则显著降低，这说明 MDE 的脱帽能力在该测试条件下更稳定。
 

 

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有编码 mRNA 脱帽酶的质粒。

产品类别:
RNA Modification

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0608S     -20    
        mRNA Decapping Enzyme M0608SVIAL -20 1 x 0.02 ml 100,000 units/ml
        mRNA Decapping Enzyme Reaction Buffer B0608SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 20 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能将 500 nM 含 m7G 帽结构底物的 50% 转化为 5´ 单磷酸化形式所需的 mRNA 脱帽酶量。

    反应条件

    1X mRNA 脱帽酶反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X mRNA 脱帽酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    50 mM Ammonium Chloride
    5 mM MgCl2
    1 mM DTT
    0.1% Poloxamer 188
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    300 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

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    • m0239-t4-rna-ligase-2-dsrna-ligase

  • 参考文献

    1. Paquette, DR., et. al (2018). RNA. 24 (2), 251-257.
    2. Grudzien-Nogalska, E., and Kiledjian M (2017). Wiley Interdiscip Rev RNA. 8, e1379.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Standard Decapping Protocol (NEB #M0608)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does mRNA Decapping Enzyme remove 5′ triphosphates?
    2. Is mRNA Decapping Enzyme activity sensitive to RNA secondary structure?
    3. Does mRNA Decapping Enzyme have a preference for longer or shorter RNA?
    4. Is mRNA Decapping Enzyme active in other NEB reaction buffers?
    5. Does mRNA Decapping Enzyme require the presence of metals for activity?
    6. Is mRNA Decapping Enzyme active at higher temperatures?