快速 CIP |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

快速 CIP 是重组表达的热敏小牛肠碱性磷酸酶（CIP）。快速 CIP 可非特异性催化 DNA 和 RNA 的 5′ 和 3′ 末端磷酸单酯的去磷酸化。另外，还水解核糖核苷酸和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。快速 CIP 可用于各种 DNA 或 RNA 末端去磷酸化的实验。在克隆中，对线性化质粒 DNA 去磷酸化，可防止自连。该酶可以快速作用于 5′ 突出端、5′ 凹陷端和平末端，反应时间仅需 10 分钟。快速 CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP分析。

与不可热失活的野生型 CIP 相比，快速 CIP 80℃ 加热 2 分钟即可完全且不可逆地失活。°因此在连接或末端标记前无需去除快速 CIP。 

产品来源

小牛肠碱性磷酸酶基因克隆自小牛肠粘膜并在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

产品类别:
Phosphatases Products,
RNA Modification

应用:
Dephosphorylation,
Fast Cloning: Accelerate your cloning workflows with reagents from NEB

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0525V     -20    
        Quick CIP M0525VVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0525S     -20    
        Quick CIP M0525SVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0525L     -20    
        Quick CIP M0525LVIAL -20 1 x 1 ml 5,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 1 ml 反应体系中，37℃ 条件下，1 分钟内水解 1 μmol 对硝基苯磷酸盐（PNPP）（NEB #P0757）所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Incubate at 37°C

    rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    25 mM Tris-HCl
    1 mM MgCl2
    0.1 mM ZnCl2
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    80°C for 2 minutes

    单位活性检测条件

    1 M 二乙醇胺-HCl（pH 9.8）、0.5 mM MgCl2、50 mM 对硝基苯磷酸盐。这些条件仅用于定量酶活性。

  • 优势和特性

    Features

    • 快速且不可逆的热失活特性，节省纯化步骤
    • 贮存稳定性优于野生型酶
    • 快速建立反应（无需锌等额外添加剂）并缩短温育时间
    • 反应条件灵活（兼容任何限制性内切酶缓冲液，无需纯化）
    • 所需酶量更少（活性更高），从而降低每次反应的成本
    • 无需多种磷酸酶（快速 CIP 可以从 DNA、RNA 和 dNTPs 中去除 5′ 和 3′ 磷酸基）
    • 降解 PCR 产物中未掺入的 dNTP，提高 DNA 测序和 SNP 分析质量
    • 重组酶保证纯度、批间一致性和更高性价比

    应用特性

    • DNA 和 RNA 的 5′ 与 3′ 末端的去磷酸化。
    • 克隆载体 DNA 去磷酸化，防止载体自连。
    • 在使用 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）标记末端前对 DNA 进行去磷酸化。
    • 在测序或 SNP 分析前去除 PCR 反应中的 dNTP。

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    • Exo-CIP™ 快速 PCR 纯化试剂盒

  • 注意事项

    1. 快速 CIP 与大多数碱性磷酸酶一样，是一种 Zn2+ 和 Mg2+ 依赖型酶。在我们的制剂中，锌原子被紧密结合在活性中心，因此无需补充锌或其它添加剂。
    2. 快速 CIP 在 1X NEBuffer 1.1、2.1、3.1 以及 NEBuffer 1、2、3、4 和用于 EcoRI 的 NEBuffer 中均有活性。
    3. 单价盐可提高快速 CIP 的活性。
    4. 金属螯合剂（如 EDTA）、无机磷酸盐和磷酸盐类似物会抑制快速 CIP。
    5. 存在还原剂（DTT、β-巯基乙醇）时快速 CIP 活性降低。
    6. 快速 CIP 是同源二聚体。单体分子量为 56 kDa。

  • 参考文献

    1. Weissig, H. et al (1993). Biochem. J. 290, 503-508.
    2. Manes, T (1998). J. Biol. Chem. 273, 23353-23360.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Dephosphorylation of 5′ ends of DNA using Quick CIP (NEB #M0525)
    2. Enzymatic PCR Cleanup Protocol (NEB #M0525)

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Phosphatase Selection Chart

  • Web 工具

    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Which alkaline phosphatase, Quick CIP, rSAP or Antarctic Phosphatase works best?
    2. The number of colonies that do not contain an insert seems high. How can I tell if Quick CIP worked?
    3. What phosphate groups are removed by rSAP, Quick CIP, or Antarctic Phosphatase (AnP)?
    4. Does the DNA need to be purified after treatment with Quick CIP?
    5. What is the effect of metal chelators, inorganic phosphate and phosphate analogs on Quick CIP activity?
    6. What is the effect of monovalent salts on Quick CIP activity?
    7. What is the effect of reducing agents on Quick CIP activity?
    8. Will Quick CIP, rSAP or Antarctic Phosphatase (AnP) dephosphorylate proteins?
    9. Can Quick CIP be heat inactivated?
    10. Does the DNA need to be purified after a restriction digest and prior to the dephosphorylation step?
    11. Are the alkaline phosphatases active in NEBuffers?
    12. Cloning Problem: Too much background in the transformation step.
    13. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?