SP6 RNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

噬菌体 SP6 RNA 聚合酶是一种 DNA 依赖型 RNA 聚合酶，对 SP6 噬菌体启动子具有高度特异性。该聚合酶的分子量为 98.5 kD，通过 SP6 噬菌体启动子从一个克隆的 DNA 模板体外合成 RNA。使用 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 适用于各种科研应用和生物技术。

反应条件：
1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及含有 SP6 RNA 聚合酶启动子的 DNA 模板。37℃ 孵育。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。

产品类别:
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0207S     -20    
        SP6 RNA Polymerase M0207SVIAL -20 1 x 0.1 ml 20,000 units/ml
        RNAPol Reaction Buffer B9012SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol ATP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X RNAPol 反应缓冲液
    Supplement with 0.5 mM ATP, 0.5 mM GTP, 0.5 mM UTP  和 0.5 mM CTP
    Incubate at 37°C

    1X RNAPol 反应缓冲液
    40 mM Tris-HCl
    6 mM MgCl2
    1 mM DTT
    2 mM spermidine
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    20 mM β-ME
    1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.1% (w/v) Triton® X-100
    pH 7.9 @ 25°C

    单位活性检测条件

    50 μl 反应体系：1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及含 SP6 噬菌体启动子的 DNA 模板 1 μg。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 制备放射性标记的 RNA 探针
    • 非同位素 RNA 标记
    • RNA 疫苗制备
    • 靶基因的向导 RNA
    • 用于体外翻译和显微注射的 mRNA
    • 用于结构、加工和催化性能研究的 RNA
    • RNA 扩增
    • 合成 RNA 反义链，调控基因表达

  • 相关产品

    相关产品

    • dsRNA Ladder
    • rNTP 混合液
    • ssRNA Ladder
    • m0251-t7-rna-polymerase
    • 无机焦磷酸酶（大肠杆菌）
    • 2X RNA 上样染料
    • E. coli Poly(A) 聚合酶
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    • 热稳定无机焦磷酸酶
    • mRNA 帽结构 2-O-甲基转移酶
    • m2080-vaccinia-capping-system

  • 注意事项

    1. 对于放射性标记高特异性 RNA 探针，放射性核苷酸的浓度不应超过 6 μM。
    2. 为了防止核糖核酸酶降解 RNA ，反应中 RNase 抑制剂（NEB #M0314 或 #M0307）终浓度应为 1 U/μl 。
    3. SP6 RNA 聚合酶对盐抑制极其敏感。盐总浓度不应超过 50 mM。
    4. SP6 RNA 聚合酶在 40℃ 条件下的活性略高于 37℃ 条件下的活性。对于含有复杂二级结构的 RNA 转录本，可考虑在 40℃ 条件下进行温育。

  • 参考文献

    1. Schenborn, E.T. and Meirendorf, R.C. (1985). Nucl. Acids Res. 13, 6223-6236.
    2. Zinn, K. et al. (1983). Cell. 34, 865-879.
    3. Butler, E.T. and Chamberlin, J. (1982). J. Biol. Chem. 257, 5772-5778.
    4. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual . (2nd ed.), 10.27-10.37.
    5. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (2nd ed.), 18.82-18.84.
    6. Melton, D.A., Krieg, P.A., Rebagliati, M.R., Maniatis, T., Zinn, K. and Green, M.R. (1984). Nucl. Acids Res. 12, 7057-7070.
    7. Kreig, P.A. and Melton, D.A. (1984). Nucl. Acids Res. 12, 7057-7070.
    8. Green, M.R., Maniatis, R. and Melton, D.A. (1983). Cell. 32, 681-694.
    9. Melton, D.A. (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 144-128.
    10. Milligan, J.F., Groebe, D.R., Witherell, G.W. and Uhlenbeck, O.C. (1987). Nucl. Acids Res. 15, 8783.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. SP6 In Vitro Transcription Reaction Protocol (M0207)

  • 应用实例

    • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart
    • RNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does the transcription reaction with SP6 RNA Polymerase require a primer?
    2. Does SP6 RNA Polymerase leave an extra base at the end of a transcript?
    3. Will SP6 RNA Polymerase work on single stranded substrate?
    4. Will SP6 RNA Polymerase work on uncut plasmid DNA?
    5. Can aberrant RNA be produced when using SP6 RNA Polymerase?
    6. Can I use SP6 RNA Polymerase to make high specific activity radiolabeled probes?
    7. Why is the specific activity of the probe low?
    8. What are the main causes of reaction failure using SP6 RNA Polymerase?

  • 实验技巧

    如果反应缓冲液超过 6 个月，需在反应体系中添加新配置的 DTT。

    将每种 rNTP 的浓度增加到 4 mM，MgCl2 的浓度增加到 20 mM，可提高产量。