核酸外切酶 T |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

核酸外切酶 T（Exo T），又称 RNase T，是一种单链 RNA（1，2）或 DNA（3，4）特异性核酸酶，该酶需要游离的 3´ 末端，沿 3´→5´方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 可用于将含有 3´ 突出末端（2）的 RNA（5）或 DNA 分子的末端平齐化。

产品来源

核酸外切酶 T 与麦芽糖结合蛋白（MBP）进行 C-端融合后，过表达并纯化。随后用 Factor Xa 蛋白酶从核酸外切酶 T 上切除 MBP，最后纯化去除 Xa 因子和 MBP。从 MBP 上切割的核酸外切酶 T 在 N 端多出一个氨基酸，且 Phe 替换了 Met（即 Glu-Phe-Exo T 而非 Met-Exo T）。

产品类别:
RNases,
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0265S     -20    
        Exonuclease T M0265SVIAL -20 1 x 0.05 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0265L     -20    
        Exonuclease T M0265LVIAL -20 1 x 0.25 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 25℃ 条件下，30 分钟从 50 pmol Fam 标记的多聚胸腺嘧啶核苷底物生成 1 nmol 单个 dT 核苷酸所需要的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 4
    Incubate at 25°C

    1X NEBuffer™ 4
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ 1: 100%
    NEBuffer™ 2: 75%
    NEBuffer™ 3: 25%

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • NEBuffer 4

  • 注意事项

    1. 核酸外切酶 T 对 RNA 和 DNA 具有不同的活性。对于 RNA，在标准反应条件下，1 单位核酸外切酶 T 可以完全消化 1.0 pmol 的 rA20，反应结果通过凝胶电泳检测。
    2. 3´ 末端含有 C 碱基的单链 RNA 分子可能难以被核酸外切酶 T 消化。
    3. 核酸外切酶 T 能够切除单链 DNA 突出末端，但不适用于两个相邻胞嘧啶核苷酸。  “尽管 RNase T 可在其活性位点结合多达 10 个核苷酸，但其特异性主要取决于最后 4 个碱基。单个 3´ 末端 C 碱基可将 RNase T 的作用降低 100 多倍，而 2´末端 C 碱基基本上可终止该酶活性。”（PMID：12050169 DOI：10.1074/jbc.M204252200）

  • 参考文献

    1. Deutscher, M. P., Marlor, C. W. and Zaniewski, R. (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 81, 4290–4293.
    2. Deutscher, M. P. and Marlor, C. W. (1985). J. Biol. Chem. 260, 7067–7071.
    3. Viswanathan, M., Dower, K. D. and Lovett, S. T. (1998). J. Biol. Chem. 273, 35126–35131.
    4. Zuo, Y. and Deutscher, M. P. (1999). Nucleic Acid Res. 27, 4077–4082.
    5. Zeng, Y. and Cullen, B. R. (2004). Nucleic Acid Res. 32, 4776–4780.
    6. Zuo, Y. and Deutscher, M.P. (2002). J. Biol. Chem. 277, 29654-61.

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

  • 研究摘要

    • Choosing the Right Exonuclease (2019)