Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
 

NEBNext® Q5 热启动超保真 PCR 预混液是独创的 Q5 DNA 聚合酶热启动 NEBNext 剂型。在所有的 NEBNext Ultra 试剂盒中，均含有此剂型，用于 DNA 和 RNA 文库制备。

NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。

这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。

这款便捷的 2X 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。加入热启动适配体后，可以更方便地在室温下建立反应体系。

覆盖深度与未扩增文库的相关性
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行文库扩增来对扩增的均一性进行评价。Y 轴表示以 hg19 为参考基因组，每 10 kb 的平均覆盖深度；X 轴表示 PCR-Free 文库的 reads 数。使用 NEBNext Ultra DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7370）制备文库，并在 HiSeq® 2500 上进行测序，测序结果以 hg19 为参考基因组进行比对（Bowtie 2.1.0）、重复标记（Picard 1.56）以及向下抽样至 420M reads（Picard 1.56）。使用 Bedtools（2.19.1）统计 hg19 每个 10 kb 区间上的 reads，再将碱基 reads 除以间隔长度（10 kb）来计算平均覆盖度。
NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液可将 GC 偏好性降至最低
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
未经 PCR 扩增的人类（IMR-90）或大肠杆菌 K12 基因组 DNA 文库和使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行扩增的相应文库，同时在 Illumina MiSeq® 上测序。GC 偏差图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化后的覆盖度由蓝色圆圈表示，参考序列的 GC 含量（%）由红线表示，碱基质量由绿线表示。与 PCR-free 文库相比，使用 NEBNext 热启动超保真 PCR 预混液扩增的文库中也可以观察到类似的 GC 偏差。

反应条件
NEBNext Q5 热启动超保真PCR 预混液、DNA 模板和 0.5 μM 到 1.25 μM 的引物（视样品加入量而定），总反应体积为 50 μl。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
Master Mixes Products,
Next Generation Sequencing Library Preparation Products

应用:
Polymerases for NGS Library Preparation,
Hot Start PCR,
Fast PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0543S     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 1 x 1.25 ml Not Applicable
    • M0543L     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 5 x 1.25 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 二代测序文库扩增
    • 超保真 PCR
    • 难扩增片段
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • NEBNext® Ultra 连接模块
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（8 x 12 种双端 Index 引物）
    • NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 4（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（96 种单端 Index 引物）

  • 注意事项

    1. To ensure optimal performance, themaster mix should be thawed and resuspendedprior to use. Stability testing using up to 30 freeze/thaw cycles has shown no negative effect onmaster mix performance. The NEBNext Q5 HotStart HiFi PCR Master Mix may be liquid at –20°C.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for a PCR reaction using NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix (M0543)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What’s New About NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    2. What types of beads can be used with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    3. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as the Q5® Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix (M0494)?
    4. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)?
    5. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541), or Q5 Hot Start High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0494)?
    6. Do I need to make any changes to the cycling conditions for my NGS library amplification I have previously been using with Phusion High-Fidelity PCR Master Mix?
    7. How many cycles of PCR should I perform with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    8. Are the DNA products produced by NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix blunt-ended or do they have a single base 3’ overhang?
    9. What do I do if I see precipitation in the NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    10. What are the advantages of using NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    11. Will NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix incorporate dUTPs?